公开(公告)号：CN118853592A

公开(公告)日：2024-10-29

申请号：CN202411294237.5

申请日：2024-09-14

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 钱莺娟 ,  郑龙三 ,  鲍晨沂

IPC: C12N7/00 ,  C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N15/64 ,  A61K39/245 ,  A61P31/22 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明属于基因工程疫苗技术领域，涉及一种Meq和LORF1双基因缺失重组马立克氏病毒（MDV）及其构建方法、应用。所述方法包含构建MDV Md5毒株的细菌人工染色体（BAC）系统的方法，利用该系统构建Meq或/和LORF1基因缺失重组毒株的方法。研究表明，本发明利用BAC系统获得的重组病毒rMd5具有与亲本毒Md5相同的体内、体外生物学特征。在此基础上，构建的Meq基因缺失重组病毒（rMd5ΔMeq）失去在鸡体上的致瘤能力，鸡群无死亡，但出现法氏囊萎缩的现象；LORF1基因缺失重组病毒（rMd5ΔLORF1）接种鸡群后，与阳性对照组相比，致病力下降，法氏囊未出现萎缩的现象；Meq和LORF1双基因缺失重组病毒（rMd5ΔMeq&LORF1）接种鸡群后，以强毒株进行攻毒，鸡群无死亡，免疫器官均未出现萎缩。由此可见，本发明获得的重组毒株rMd5△Meq&LORF1可用于预防马立克氏病，以应对毒力逐渐增强的田间流行毒株。

公开(公告)号：CN117487761A

公开(公告)日：2024-02-02

申请号：CN202311239439.5

申请日：2023-09-25

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 钱莺娟 ,  郑龙三 ,  鲍晨沂

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/85 ,  C12N15/38 ,  C12N7/00 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及生物技术领域，具体涉及表达Cre基因猪骨髓巨噬细胞系的构建方法及其应用；发明所述的方法包含电穿孔原代猪骨髓巨噬细胞引入SV40LT基因使其永生化的方法，在该细胞上继续构建稳定表达Cre基因的猪骨髓巨噬细胞系的方法和利用该细胞系去除基因缺失重组病毒中筛选标记基因的方法。本发明采用的方法是将含有SV40LT基因的转座子系统，以电穿孔的方式引入原代猪骨髓巨噬细胞，筛选出优质的永生化猪骨髓巨噬细胞。在该永生化的猪骨髓巨噬细胞上继续电穿孔引入Cre基因使其稳定表达Cre蛋白，可在构建基因缺失疫苗过程中切除筛选标记基因中应用。

公开(公告)号：CN117487760A

公开(公告)日：2024-02-02

申请号：CN202311239432.3

申请日：2023-09-25

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 钱莺娟 ,  郑龙三 ,  鲍晨沂

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/85 ,  C12N15/54 ,  C12N15/12 ,  C12N7/00 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及生物技术领域，一种猪骨髓巨噬细胞及其构建方法、应用；所述的方法包含电穿孔原代猪骨髓巨噬细胞引入pTERT、pCDK4(R24C)和pCCND1基因使其永生化的方法，在该细胞上继续构建稳定表达Cre基因的猪骨髓巨噬细胞系的方法和利用该细胞系去除基因缺失重组毒株上筛选标记基因的方法。本发明采用的方法是将分别含有pTERT、pCDK4(R24C)和pCCND1的转座子载体和转座酶载体，以电穿孔的方式引入原代猪骨髓巨噬细胞，筛选出永生化猪骨髓巨噬细胞。在永生化的猪骨髓巨噬细胞上继续电穿孔引入Cre基因使其稳定表达Cre蛋白，可在构建基因缺失重组毒株过程中切除筛选标记基因中应用。