公开(公告)号：CN110438118B

公开(公告)日：2022-07-05

申请号：CN201910431970.X

申请日：2019-05-22

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 陈劲枫 ,  孟雅 ,  翟于菲 ,  虞夏清

IPC: C12N15/10

Abstract: 本发明公开了一种提取黄瓜线粒体及其DNA的方法，属于植物生物技术领域。以黄瓜黄化苗为材料，调整提取过程组织匀浆缓冲液成分和差速离心力组合，结合percoll密度梯度离心分离得到线粒体，并使用3％CTAB裂解线粒体，后续用氯仿‑异戊醇抽提得到高质量mtDNA。最终所提取线粒体完整性好，纯化后mtDNA浓度为158ng·μL‑1，每20g叶片可得7.9μg mtDNA。其中A260/A280约1.87，说明本方法提取分离得到的mtDNA纯度高。本发明首次建立一套适用于黄瓜mtDNA提取纯化的有效体系，对于其他物种构建mtDNA提取纯化体系具有参考意义。

公开(公告)号：CN110438118A

公开(公告)日：2019-11-12

申请号：CN201910431970.X

申请日：2019-05-22

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 陈劲枫 ,  孟雅 ,  翟于菲 ,  虞夏清

IPC: C12N15/10

Abstract: 本发明公开了一种提取黄瓜线粒体及其DNA的有效方法，属于植物生物技术领域。以黄瓜黄化苗为材料，调整提取过程组织匀浆缓冲液成分和差速离心力组合，结合percoll密度梯度离心分离得到线粒体，并使用3％CTAB裂解线粒体，后续用氯仿-异戊醇抽提得到高质量mtDNA。用甘露醇和半胱氨酸取代传统方法的蔗糖和巯基乙醇配成的匀浆缓冲液A所提取线粒体完整性好，分离细胞破碎组织及纯化线粒体离心力分别为2000×g、17000×g时得到明显的线粒体聚层，纯化后mtDNA浓度为158ng·μL-1，每20g叶片可得7.9μg mtDNA。其中A260/A280约1.87，说明本方法提取分离得到的mtDNA纯度高。本发明首次建立一套适用于黄瓜mtDNA提取纯化的有效体系，对于其他物种构建mtDNA提取纯化体系具有参考意义。