公开(公告)号：CN103820551A

公开(公告)日：2014-05-28

申请号：CN201410067111.4

申请日：2014-02-27

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 董立尧 ,  潘浪 ,  李俊 ,  徐洪乐

IPC: C12Q1/68

CPC classification number: C12Q1/6844 ,  C12Q2531/119

Abstract: 本发明公开了一种基于LAMP技术快速鉴定含有Ile-1781-Leu突变的抗精恶唑禾草灵的菵草基因型的分子检测方法，可用于含有该种突变的菵草的早期预警和流行监测。该检测方法共分3个主要步骤，(1)分别提取待测样品的基因组DNA；(2)设计特异性引物，进行LAMP恒温扩增；(3)在上述LAMP扩增产物中加入荧光染料SYBR？Green？I，观察其颜色变化；也可在3.0％琼脂糖凝胶电泳上分离，观察扩增结果。根据结果鉴定是否为具有Ile-1781-Leu突变的菵草种群；如果LAMP扩增产物显示黄色，这时电泳图谱应为梯状条带，判定为带有Ile-1781-Leu突变的菵草种群；如果扩增产物为橙色，这时电泳图谱无条带扩增，判定为不带有Ile-1781-Leu突变的菵草种群。本发明实现了恒温扩增，不需要昂贵的仪器设备、繁琐的电泳过程，使检测时间和成本大大降低。与普通PCR相比，本发明还具有灵敏度高、特异性强、检测准确性高等特点。

公开(公告)号：CN103882121A

公开(公告)日：2014-06-25

申请号：CN201410066925.6

申请日：2014-02-27

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 董立尧 ,  徐洪乐 ,  李俊 ,  潘浪

IPC: C12Q1/68

CPC classification number: C12Q1/686 ,  C12Q2521/301

Abstract: 本发明公开了一种基于dCAPS技术检测导致日本看麦娘对ACCase抑制剂类除草剂产生抗性的相关突变的分子检测方法，可用于对日本看麦娘抗性相关突变进行快速准确的检测，本发明属于生物技术领域。根据日本看麦娘与抗性相关的ACCase基因，针对不同突变分别设计引物，以日本看麦娘基因组DNA为模板进行PCR扩增并获得扩增片段；选择相应的限制性内切酶对上述的PCR扩增片段进行酶切；酶切后根据琼脂糖凝胶电泳可判断日本看麦娘是否具有抗性相关突变及其突变的基因型。相对于传统的突变检测方法，本发明的特异性强，准确度高，方法更加快速简单，并且大大降低了检测成本，为日本看麦娘抗性相关突变的检测提供了一种优良的分子检测方法。