公开(公告)号：CN105602923B

公开(公告)日：2019-03-12

申请号：CN201610032842.4

申请日：2016-01-18

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 约瑟夫·弗戈迈 ,  刘丽 ,  杜雅珉

IPC: C12N9/80 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P21/00 ,  C12P19/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明属于生物工程领域，公开一种N‑糖酰胺酶D的异源表达及其应用。N‑糖酰胺酶D在酶解糖蛋白上的N‑链寡糖中的应用，所述N‑糖酰胺酶D的氨基酸序列如SEQ NO.1所示。本发明通过酶活性测定和底物特异性的分析，发现所述N‑糖酰胺酶D能作用于糖蛋白和糖肽，并最大限度酶切不同类型的N‑糖链结构，无自身糖基化污染，兼具了PNGase F和PNGase A两者优点的同时摒弃了它们的缺点。本发明利用基因工程手段克隆表达了重组N‑糖酰胺酶D，实现了N‑糖酰胺酶D的大量表达，获得了N‑糖酰胺酶D。

公开(公告)号：CN105602923A

公开(公告)日：2016-05-25

申请号：CN201610032842.4

申请日：2016-01-18

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 约瑟夫·弗戈迈 ,  刘丽 ,  杜雅珉

IPC: C12N9/80 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P21/00 ,  C12P19/00 ,  C12R1/19

CPC classification number: C12N9/80 ,  C12N15/70 ,  C12N2800/101 ,  C12P19/00 ,  C12P21/00

Abstract: 本发明属于生物工程领域，一种新型优质N-糖酰胺酶D的异源表达及其应用。N-糖酰胺酶D在酶解糖蛋白上的N-链寡糖中的应用，所述N-糖酰胺酶D的氨基酸序列如SEQNO.1所示。本发明通过酶活性测定和底物特异性的分析，发现所述N-糖酰胺酶D能作用于糖蛋白和糖肽，并最大限度酶切不同类型的N-糖链结构，无自身糖基化污染，兼具了PNGase F和PNGase A两者优点的同时摒弃了它们的缺点。本发明利用基因工程手段克隆表达了重组N-糖酰胺酶D，实现了N-糖酰胺酶D的大量表达，获得了优质的N-糖酰胺酶D。

公开(公告)号：CN105505906A

公开(公告)日：2016-04-20

申请号：CN201610031649.9

申请日：2016-01-18

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 约瑟夫·弗戈迈 ,  刘丽 ,  杜雅珉

IPC: C12N9/80 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70

CPC classification number: C12N9/80 ,  C12N2800/101

Abstract: 本发明公开了一种定点突变改造的N-糖酰胺酶D及其制备方法和应用，该定点突变改造的N-糖酰胺酶D是由氨基酸序列为SEQ ID NO.1的野生型N-糖酰胺酶D在102位或236位氨基酸定点突变而产生的。突变后的酶不具有酶解N-链寡糖的能力，但其可以特异性的识别糖蛋白，从而达到分离纯化糖蛋白的目的。