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公开(公告)号：CN108949908B
公开(公告)日：2019-12-27
申请号：CN201810768488.0
申请日：2018-07-13
Applicant: 南京农业大学 , 南京农业大学淮安研究院
IPC: C12Q1/6806 , C12Q1/6895 , C12Q1/04 , C12R1/885
Abstract: 本发明公开了一种两步基因组比较法设计贵州木霉NJAU 4742定量PCR特异性引物的方法。本发明首先将NJAU 4742全基因组序列在NCBI和JGI数据库中比对，选出没有匹配的大于500bp的基因组片段，再将筛选得到的片段与同种菌株916的全基因组比对，设计出系列具独特碱基的引物序列。同时，还选用gfp标记菌株gfp‑NJAU 4742中插入的标记片段设计的三对引物作为对基于基因组设计的引物特异性的检验标准。通过同属不同种菌株扩增特异性检验、土壤添加再检测、盆栽土壤实际检测等步骤，筛选出最优的定量PCR引物。本发明的引物设计方法和设计的菌株特异性引物能够为其他菌株的定量PCR特异性引物设计和贵州木霉NJAU 4742的定量提供方法。
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公开(公告)号：CN108949908A
公开(公告)日：2018-12-07
申请号：CN201810768488.0
申请日：2018-07-13
Applicant: 南京农业大学 , 南京农业大学淮安研究院
IPC: C12Q1/6806 , C12Q1/6895 , C12Q1/04 , C12R1/885
Abstract: 本发明公开了一种两步基因组比较法设计贵州木霉NJAU 4742定量PCR特异性引物的方法。本发明首先将NJAU 4742全基因组序列在NCBI和JGI数据库中比对，选出没有匹配的大于500bp的基因组片段，再将筛选得到的片段与同种菌株916的全基因组比对，设计出系列具独特碱基的引物序列。同时，还选用gfp标记菌株gfp‑NJAU 4742中插入的标记片段设计的三对引物作为对基于基因组设计的引物特异性的检验标准。通过同属不同种菌株扩增特异性检验、土壤添加再检测、盆栽土壤实际检测等步骤，筛选出最优的定量PCR引物。本发明的引物设计方法和设计的菌株特异性引物能够为其他菌株的定量PCR特异性引物设计和贵州木霉NJAU 4742的定量提供方法。
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公开(公告)号：CN114806901B
公开(公告)日：2023-09-08
申请号：CN202210449442.9
申请日：2022-04-27
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种harzianic acid高产木霉菌株的构建方法，（1）以野生型木霉菌株基因组DNA为模板进行PCR扩增，获取hacI编码序列上游片段和hacI编码区部分片段，分别命名为UF和DF；（2）以质粒pUC19‑hph‑Ptef1为模板进行PCR扩增，获取包含潮霉素B磷酸转移酶元件hph和里氏木霉QM6a中tef1基因启动子序列的片段Ptef1，命名为hph‑Ptef1；（3）利用重叠PCR方法将上述3个片段按以下顺序连接，UF、hph‑Ptef1、DF获得超表达元件，命名为UF‑hph‑Ptef1‑DF；（4）将步骤（3）中超表达元件转入木霉菌的原生质体中，经潮霉素B筛选、PCR验证和HPLC检测后，获得高产harzianic acid的木霉菌株OEhacI。本发明的方法构建的harzianic acid高产菌株，在发酵4天即可在常规培养基PDB中摇瓶产生大量harzianic acid，从而为规模化生产harzianic acid提供有效开发技术和相应工程生产菌。
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公开(公告)号：CN114806901A
公开(公告)日：2022-07-29
申请号：CN202210449442.9
申请日：2022-04-27
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种harzianic acid高产木霉菌株的构建方法，（1）以野生型木霉菌株基因组DNA为模板进行PCR扩增，获取hacI编码序列上游片段和hacI编码区部分片段，分别命名为UF和DF；（2）以质粒pUC19‑hph‑Ptef1为模板进行PCR扩增，获取包含潮霉素B磷酸转移酶元件hph和里氏木霉QM6a中tef1基因启动子序列的片段Ptef1，命名为hph‑Ptef1；（3）利用重叠PCR方法将上述3个片段按以下顺序连接，UF、hph‑Ptef1、DF获得超表达元件，命名为UF‑hph‑Ptef1‑DF；（4）将步骤（3）中超表达元件转入木霉菌的原生质体中，经潮霉素B筛选、PCR验证和HPLC检测后，获得高产harzianic acid的木霉菌株OEhacI。本发明的方法构建的harzianic acid高产菌株，在发酵4天即可在常规培养基PDB中摇瓶产生大量harzianic acid，从而为规模化生产harzianic acid提供有效开发技术和相应工程生产菌。
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公开(公告)号：CN111944840A
公开(公告)日：2020-11-17
申请号：CN202010806890.0
申请日：2020-08-12
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了木霉菌Azaphilones类次级代谢产物的应用。木霉菌Azaphilones类次级代谢产物在制备抗氧化剂中的应用。一种工程菌株，其特征在于将以hph为筛选标记，Pcdna1为强启动子过量表达tgaza5的重组质粒转化SQR-T037野生型菌株所得。所述的工程菌株在制备所述的木霉菌Azaphilones类次级代谢产物中的应用。本发明鉴定了一种azaphilones类新型抗氧化剂及其衍生物，并解析其合成基因簇，在医用和农用新药物或者药物中间体的开发、生产中有重要的价值。
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