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公开(公告)号：CN116590278B
公开(公告)日：2024-01-02
申请号：CN202310058487.8
申请日：2023-01-17
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/10
Abstract: 本发明公开了一种基于原位裂解和脉冲凝胶电泳相结合的叶绿体环状基因组的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）待提取作物的预处理，得到用于叶绿体细胞器提取的叶片；（2）将叶片快速浸入ET‑M‑D体系中10~20min，用W5‑3溶液清洗三次后，通过等差离心法和密度梯度离心法去除杂物，得到叶绿体粗提溶液；所述ET‑M‑D体系包括以下终浓度的成分：0.6M甘露醇，0.05MMES，0.03MTris和75%的乙醇；（3）使用叶绿体粗提溶液构建叶绿体细胞器包埋胶栓；（4）Et‑S裂解液结合NDS‑1体系裂解胶栓中的叶绿体细胞器；（5）通过脉冲场凝胶电泳分离纯化叶绿体基因组；（6）电洗脱回收叶绿体环状基因组；（7）利用RecBCDase体系清除电洗脱步骤中产生的断裂核酸片段。本发明所述方法可提取高纯度的Cir‑cpDNA。
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公开(公告)号：CN116103376B
公开(公告)日：2024-04-05
申请号：CN202310110762.6
申请日：2023-02-14
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6844
Abstract: 本发明公开了一种基于RCA和DNA聚合酶矫正反应的长链DNA扩增方法，包括：（1）构建多重置换体系A和置换程序，以环状dsDNA为模板，获得Exo‑primer和环状ssDNA的复合结构；（2）构建环化扩增体系B和扩增程序，以步骤（1）得到的复合结构为模板，进行单链环化扩增；（3）构建多重同时位移扩增体系C和扩增程序，以步骤（2）得到的单链环化扩增产物为模板，进行长链dsDNA的扩增，并对扩增产物中的Flags进行剪切形成cleavages；（4）构建DNA聚合酶矫正反应体系和程序，对步骤（3）中得到的产物进行非正常结构的修复。本发明方法可稳定的扩增约200kb的DNA片段，这在克隆、表达和靶向基因组测序等方面有许多应用；该方法极大的扩展了DNA扩增的容量，在生物领域有很大的应用潜力。
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公开(公告)号：CN103436539A
公开(公告)日：2013-12-11
申请号：CN201310395257.7
申请日：2013-09-03
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/29 , C12N15/82 , C07K14/415 , A01H5/00
Abstract: 本发明属于基因工程领域，公开了一种香根草水孔蛋白基因VzPIP2-1及其植物表达载体及其应用。香根草质膜水孔蛋白VzPIP2-1基因，其CDS序列如SEQ ID NO.1所示。其编码的蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明基因为该种植物中首次报道，参与香根草植株体内的水分吸收和运转。转VzPIP2-1基因大豆植株吸水能力或含水量和蒸腾速率（Tr）比其原种显著提高。因此，本发明VzPIP2-1基因可用于构建或创制高吸水和运转能力的转基因植物，改善植物水分关系，促进植物的生长发育和水分利用。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102282931B
公开(公告)日：2013-05-22
申请号：CN201110176148.7
申请日：2011-06-28
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种利用外源大豆异黄酮缓解大豆幼苗盐害的方法，包括：（1）用DMSO溶解大豆异黄酮，配置成含1%DMSO的大豆异黄酮水溶液，浓度不大于1.0mg/L（2）用大豆异黄酮水溶液浸大豆种子，恒温箱25℃，浸种10h后置于发芽床上避光催芽；（3）取发芽苗播于盛有石英砂的具孔塑料杯中，置于盛有1/2Hoagland营养液的周转箱中，光照培养，营养液每2~3d更换一次；（4）待第1对真叶长出时，移苗至具孔的泡沫板上，在盛有用1/2Hoagland营养液配制的100~130mmol/LNaCl溶液的周转箱中进行培养，观察幼苗生长状况和测定叶面积；并在处理6d后，分为根、茎、叶三部分取样，采用HPLC法分别测定其大豆异黄酮含量。该方法可增强大豆幼苗的耐盐性，有效缓解大豆幼苗的盐害，对耐盐性弱的大豆材料效应更明显。
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公开(公告)号：CN116103376A
公开(公告)日：2023-05-12
申请号：CN202310110762.6
申请日：2023-02-14
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6844
Abstract: 本发明公开了一种基于RCA和DNA聚合酶矫正反应的长链DNA扩增方法，包括：（1）构建多重置换体系A和置换程序，以环状dsDNA为模板，获得Exo‑primer和环状ssDNA的复合结构；（2）构建环化扩增体系B和扩增程序，以步骤（1）得到的复合结构为模板，进行单链环化扩增；（3）构建多重同时位移扩增体系C和扩增程序，以步骤（2）得到的单链环化扩增产物为模板，进行长链dsDNA的扩增，并对扩增产物中的Flags进行剪切形成cleavages；（4）构建DNA聚合酶矫正反应体系和程序，对步骤（3）中得到的产物进行非正常结构的修复。本发明方法可稳定的扩增约200kb的DNA片段，这在克隆、表达和靶向基因组测序等方面有许多应用；该方法极大的扩展了DNA扩增的容量，在生物领域有很大的应用潜力。
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公开(公告)号：CN115717149A
公开(公告)日：2023-02-28
申请号：CN202211329795.1
申请日：2022-10-27
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明提供了一种pBeloBCA11‑MCS(+)重组质粒及其构建方法与应用，该重组质粒能在分子水平拓展低拷贝质粒载体pBeloBCA11的内切酶识别位点，提高pBeloBCA11质粒与目的片段重组，推动大片段基因组文库的构建和促进基因簇（gene cluster）相关研究方面的应用。
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公开(公告)号：CN116590278A
公开(公告)日：2023-08-15
申请号：CN202310058487.8
申请日：2023-01-17
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/10
Abstract: 本发明公开了一种基于原位裂解和脉冲凝胶电泳相结合的叶绿体环状基因组的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）待提取作物的预处理，得到用于叶绿体细胞器提取的叶片；（2）将叶片快速浸入ET‑M‑D体系中10~20min，用W5‑3溶液清洗三次后，通过等差离心法和密度梯度离心法去除杂物，得到叶绿体粗提溶液；所述ET‑M‑D体系包括以下终浓度的成分：0.6M甘露醇，0.05MMES，0.03MTris和75%的乙醇；（3）使用叶绿体粗提溶液构建叶绿体细胞器包埋胶栓；（4）Et‑S裂解液结合NDS‑1体系裂解胶栓中的叶绿体细胞器；（5）通过脉冲场凝胶电泳分离纯化叶绿体基因组；（6）电洗脱回收叶绿体环状基因组；（7）利用RecBCDase体系清除电洗脱步骤中产生的断裂核酸片段。本发明所述方法可提取高纯度的Cir‑cpDNA。
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公开(公告)号：CN102282931A
公开(公告)日：2011-12-21
申请号：CN201110176148.7
申请日：2011-06-28
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种利用外源大豆异黄酮缓解大豆幼苗盐害的方法，包括：（1）用DMSO溶解大豆异黄酮，配置成含1%DMSO的大豆异黄酮水溶液，浓度不大于1.0mg/L；（2）用大豆异黄酮水溶液浸大豆种子，恒温箱25℃，浸种10h后置于发芽床上避光催芽；（3）取发芽苗播于盛有石英砂的具孔塑料杯中，置于盛有1/2Hoagland营养液的周转箱中，光照培养，营养液每2~3d更换一次；（4）待第1对真叶长出时，移苗至具孔的泡沫板上，在盛有用1/2Hoagland营养液配制的100~130mmol/L NaCl溶液的周转箱中进行培养，观察幼苗生长状况和测定叶面积；并在处理6d后，分为根、茎、叶三部分取样，采用HPLC法分别测定其大豆异黄酮含量。该方法可增强大豆幼苗的耐盐性，有效缓解大豆幼苗的盐害，对耐盐性弱的大豆材料效应更明显。
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