公开(公告)号：CN101477000B

公开(公告)日：2011-11-23

申请号：CN200910028615.4

申请日：2009-01-05

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 唐灿明 ,  岳洁瑜 ,  吴李君 ,  吴跃进

IPC: G01N1/30

Abstract: 本发明是对棉花花粉管微丝骨架进行荧光标记的方法，属于生物技术领域。包括载玻片打孔做成培养花粉管的小室；将花粉在小室中培养，萌发出花粉管；培养好的花粉管用含4％多聚甲醛的50mM Pipes缓冲液(pH6.9)固定1-2h；洗涤后再置于0.1-0.2％的甘油(或0.1-0.2％浓度的TritonX-100)中室温渗透3-4h(或4℃冰箱过夜)；洗涤后用浓度为1-2.5μg/ml的TRITC(罗丹明)标记的鬼笔环肽避光染色2-4h；洗涤后在共聚焦扫描显微镜下观察。本发明操作简单，标记效果好，将在棉花花粉管细胞的骨架以及受精生殖研究中发挥重要作用，有重要的实际应用价值。

公开(公告)号：CN101413033A

公开(公告)日：2009-04-22

申请号：CN200810234566.5

申请日：2008-11-21

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 唐灿明 ,  岳洁瑜 ,  吴李君 ,  吴跃进

IPC: C12Q1/68 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明公开了一种检测棉花花粉母细胞DNA物质的荧光标记方法，属于生物技术领域。包括晴天早晨摘取花蕾，样品经不同浓度乙醇逐级下行至蒸馏水；直径小于7mm的花蕾中的花粉母细胞，置于甘油中渗透2－3h；洗涤后用DAPI避光染色1－2h，细胞内DNA物质被标记。直径大于7mm的花蕾中的成熟花粉粒，加入10％次氯酸钠水溶液于60℃水浴中处理10min；洗涤后置于0.1－0.2％甘油中渗透2－3h；洗涤后再加入DAPI溶液，静置10min后镜检，细胞内DNA物质被标记。本发明具有操作简单、快速，对细胞的损伤小，标记效果好，易观察的优点，将在棉花雄配子体发育过程的研究中发挥重要作用，实际应用价值高。

公开(公告)号：CN101413033B

公开(公告)日：2011-08-17

申请号：CN200810234566.5

申请日：2008-11-21

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 唐灿明 ,  岳洁瑜 ,  吴李君 ,  吴跃进

IPC: C12Q1/68 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明公开了一种检测棉花花粉母细胞DNA物质的荧光标记方法，属于生物技术领域。包括晴天早晨摘取花蕾，样品经不同浓度乙醇逐级下行至蒸馏水；直径小于7mm的花蕾中的花粉母细胞，置于甘油中渗透2—3h；洗涤后用DAPI避光染色1-2h，细胞内DNA物质被标记。直径大于7mm的花蕾中的成熟花粉粒，加入10％次氯酸钠水溶液于60℃水浴中处理10min；洗涤后置于0.1—0.2％甘油中渗透2-3h；洗涤后再加入DAPI溶液，静置10min后镜检，细胞内DNA物质被标记。本发明具有操作简单、快速，对细胞的损伤小，标记效果好，易观察的优点，将在棉花雄配子体发育过程的研究中发挥重要作用，实际应用价值高。

公开(公告)号：CN101477000A

公开(公告)日：2009-07-08

申请号：CN200910028615.4

申请日：2009-01-05

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 唐灿明 ,  岳洁瑜 ,  吴李君 ,  吴跃进

IPC: G01N1/30

Abstract: 本发明是对棉花花粉管微丝骨架进行荧光标记的方法，属于生物技术领域。包括载玻片打孔做成培养花粉管的小室；将花粉在小室中培养，萌发出花粉管；培养好的花粉管用含4％多聚甲醛的50mm Pipes缓冲液(pH6.9)固定1－2h；洗涤后再置于0.1－0.2％的甘油(或0.1－0.2％浓度的Triton X－100)中室温渗透3－4h(或4℃冰箱过夜)；洗涤后用浓度为1－ 2.5μg/ml的TRITC(罗丹明)标记的鬼笔环肽避光染色2－4h；洗涤后在共聚焦扫描显微镜下观察。本发明操作简单，标记效果好，将在棉花花粉管细胞的骨架以及受精生殖研究中发挥重要作用，有重要的实际应用价值。