公开(公告)号：CN117327156A

公开(公告)日：2024-01-02

申请号：CN202311167506.7

申请日：2023-09-12

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 辛志宏 ,  吴国俊 ,  王梦溪 ,  殷晨悦

IPC: C07K7/56 ,  C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  A61P31/04 ,  A61P31/10 ,  C12R1/125 ,  A61K38/00

Abstract: 本发明涉及一种新型抗菌肽的生产与应用技术，属于基因工程领域。以Bacillus subtilis 1A751Δpps为出发菌株，构建了不产生环脂肽的底盘工程菌株B.subtilis 1A751 WR。采用转化偶联重组(TAR)技术定向克隆并异源表达iturin生物合成基因簇，构建单产iturin菌株。通过CRISPR/Cas9技术，用群体感应动态启动子替换iturin天然静态启动子，所得菌株可产生4种新的C10‑C产量进一步增加13iturins，结合CRISPRi到16.7g技术抑制·L‑1，是野生AprE型菌株和NprEHYM基因‑，12使的iturin53.66倍，也是迄今为止iturin产量最高的菌株。该菌株对致病细菌和丝状病原真菌都具有强的抑制作用，半数有效抑菌浓度(IC50)为40‑60μg·mL‑1。该发明实现iturin生物合成的动态“上调和下调”，是提高脂肽产量的有效方法，可扩展到其他生物活性分子的生产调节。