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公开(公告)号：CN113025641B
公开(公告)日：2023-05-23
申请号：CN202110355936.6
申请日：2021-04-01
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种将DNA片段随机插入枯草芽孢杆菌染色体的方法及其应用。一种组合物，由选自转座子元件或含有该转座子元件的质粒和质粒pUSIGH组成。该组合物在把目标DNA片段随机插入枯草芽孢杆菌染色体中的应用。将组合物共同转化到枯草芽孢杆菌中后，转座子元件或含有该转座子元件的质粒会通过同源重组将转座子元件整合到宿主染色体中，pUSIGH可在宿主内正常独立复制。用木糖诱导pUSIGH上的转座酶基因表达，在转座酶的作用下转座子随机插入到染色体上；进而可筛选出目标蛋白表达水平较高的克隆。
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公开(公告)号：CN113801888A
公开(公告)日：2021-12-17
申请号：CN202111087629.0
申请日：2021-09-16
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了用于提高枯草芽孢杆菌自发突变频率的质粒。所述选自pUS20D9M,pUS20XP1以及pUS20XP2中的任意一个；其中，质粒pUS20D9M序列如SEQ ID NO.1所示，质粒pUS20XP1序列如SEQ ID NO.2所示，质粒pUS20XP2序列如SEQ ID NO.3所示。枯草杆菌是一种重要的微生物。很多育种工作需要提高枯草杆菌的基因突变频率。然而，目前尚缺乏理想的控制枯草杆菌自发突变频率的方法。本发明借助CRISPRi技术和过表达易错型DNA聚合酶的方法，提高宿主的自发突变频率(最高达5128倍)。整个操作可通过质粒的转化和消除实现，无需对宿主进行基因敲除。
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公开(公告)号：CN113801888B
公开(公告)日：2023-09-01
申请号：CN202111087629.0
申请日：2021-09-16
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了用于提高枯草芽孢杆菌自发突变频率的质粒。所述选自pUS20D9M,pUS20XP1以及pUS20XP2中的任意一个；其中，质粒pUS20D9M序列如SEQ ID NO.1所示，质粒pUS20XP1序列如SEQ ID NO.2所示，质粒pUS20XP2序列如SEQ ID NO.3所示。枯草杆菌是一种重要的微生物。很多育种工作需要提高枯草杆菌的基因突变频率。然而，目前尚缺乏理想的控制枯草杆菌自发突变频率的方法。本发明借助CRISPRi技术和过表达易错型DNA聚合酶的方法，提高宿主的自发突变频率(最高达5128倍)。整个操作可通过质粒的转化和消除实现，无需对宿主进行基因敲除。
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公开(公告)号：CN115717151A
公开(公告)日：2023-02-28
申请号：CN202211069296.3
申请日：2022-09-01
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 有机磷农药降解酶MPH在去除有机磷农药残留方面有很好的应用潜力，但该酶还未实现高效生产。鉴于此，本发明将来源于菌株Pseudomonas sp.M6的MPH编码基因(mpd)进行密码子优化，然后将优化后的基因连同其他表达元件整合到枯草芽孢杆菌的染色体上，构建了高效合成MPH的基因工程菌。该工程菌无任何抗生素抗性基因残留，且合成的MPH被分泌至细胞外，产量达工业生产标准。
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公开(公告)号：CN113025641A
公开(公告)日：2021-06-25
申请号：CN202110355936.6
申请日：2021-04-01
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种将DNA片段随机插入枯草芽孢杆菌染色体的方法及其应用。一种组合物，由选自转座子元件或含有该转座子元件的质粒和质粒pUSIGH组成。该组合物在把目标DNA片段随机插入枯草芽孢杆菌染色体中的应用。将组合物共同转化到枯草芽孢杆菌中后，转座子元件或含有该转座子元件的质粒会通过同源重组将转座子元件整合到宿主染色体中，pUSIGH可在宿主内正常独立复制。用木糖诱导pUSIGH上的转座酶基因表达，在转座酶的作用下转座子随机插入到染色体上；进而可筛选出目标蛋白表达水平较高的克隆。
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