公开(公告)号：CN118879778A

公开(公告)日：2024-11-01

申请号：CN202411195655.9

申请日：2024-08-29

Applicant: 南京中医药大学 ,  中国药科大学

Inventor： 王南溪 ,  谭仁祥 ,  叶慧 ,  唐槊 ,  邵畅 ,  万天妍 ,  徐陆暄

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/70 ,  C12N9/00 ,  C12N15/52

Abstract: 本发明公开了一种在哺乳动物细胞中定点插入乳酰化赖氨酸(Klac)的系统及其应用，所述系统包括编码突变型吡咯赖氨酰‑tRNA合成酶的基因，所述突变型吡咯赖氨酰‑tRNA合成酶是由马氏甲烷八叠球菌(Methanosarcina mazei)来源的吡咯赖氨酰tRNA合成酶MmPylRS进行突变所得。与现有技术相比，本发明通过Klac特异性tRNA合成酶/tRNA对，将Klac位点特异性地插入活细胞的目标蛋白质中。与以前的重组表达系统的比较表明，本发明提高了插入Klac的正交性和效率。本发明将3种酶KlacRS2、chKlacRS‑WT和chKlacRS‑IPYE首次应用在哺乳动物细胞插入系统中，用于插入Klac，插入效率高，并且还可以用于在原核细胞中插入Klac；新的酶KlacRS2、chKlacRS‑WT和chKlacRS‑IPYE，正交性显著优于现有技术中公开的KlacRS1。