公开(公告)号：CN119120511A

公开(公告)日：2024-12-13

申请号：CN202411269399.3

申请日：2024-09-11

Applicant: 南京中医药大学

Inventor： 王南溪 ,  谭仁祥 ,  藏熠琦 ,  陆银荀 ,  张雅楠 ,  展梦茹

IPC: C12N15/52 ,  C12N15/70 ,  C12N9/00 ,  C12N15/85 ,  C12P21/00 ,  C07K14/435

Abstract: 本发明公开了一种在细胞中生物合成和定点插入乙酰化赖氨酸(Kac)的系统及其应用。所述系统包括一种编码乙酰化赖氨酰‑tRNA合成酶的基因，以及编码氨基酸序列如SEQ ID NO:1‑10任意一种所示乙酰化赖氨酸合成酶的基因。与传统的乙酰化修饰重组蛋白表达技术相比，本发明不再需要将化学合成的Kac外源性添加到培养基中。相反，本发明利用前述10种乙酰化赖氨酸合成酶和乙酰化赖氨酰tRNA合成酶KacRS/tRNA对，通过创新的“一锅法”，直接在活细胞中将生物合成的Kac位点特异性地掺入目标蛋白质中，不仅省去了Kac的化学合成和提纯步骤，还极大地提升了重组蛋白乙酰化修饰的效率和特异性。