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公开(公告)号：CN114703191A
公开(公告)日：2022-07-05
申请号：CN202210409294.8
申请日：2022-04-19
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N5/10
Abstract: 本发明涉及基于CRSIPR技术构建RICTOR基因敲除细胞株的方法及其应用，属于生物技术领域，所述方法包括：首先设计用于RICTOR基因敲除的sgRNA，合成sgRNA‑RICTOR‑F和sgRNA‑RICTOR‑R两种引物序列；将合成的两条核苷酸链经退火形成双链，并与载体质粒连接，验证正确后获得重组真核表达质粒；将经构建的重组真核表达质粒转染DF‑1细胞，经筛选、验证，获得RICTOR基因敲除细胞株。该基因敲除细胞株DF‑1ΔRICTOR与DF‑1正常细胞株在细胞活性上没有显著的差异，且传代稳定，RICTOR基因mRNA转录水平几乎接近于0，敲低效果显著。
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