公开(公告)号：CN108754019B

公开(公告)日：2022-04-08

申请号：CN201810532731.9

申请日：2018-05-29

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 郭霄峰 ,  莫梅君 ,  邝燕齐

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒ORF1基因全序列的扩增方法，扩增方法中涉及8对引物，各引物对上下游引物依次如SEQ ID NO.1～16。具体扩增步骤为提取PEDV总RNA，反转成cDNA，用所述8对引物进行扩增反应，将PCR产物连接到克隆载体pTA2 Vector中，转化TOP10感受态细胞，选取阳性克隆，测序鉴定，最后拼接序列，得到ORF1基因组全序列。可以通过该方法扩增获取病料中猪流行性腹泻病毒变异株的ORF1基因，并可以捕获猪流行性腹泻病毒变异株在细胞培养传代过程中基因序列的变化。也可以作为一种检测病料中PEDV的方法，并为PEDV的ORF1基因相关研究奠定基础。

公开(公告)号：CN113337525A

公开(公告)日：2021-09-03

申请号：CN202110363023.9

申请日：2021-04-02

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 郭霄峰 ,  李洁森 ,  莫炜钰 ,  邝燕齐 ,  莫梅君

IPC: C12N15/50 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C07K14/165 ,  C07K1/36 ,  C07K1/34 ,  C07K1/30 ,  C07K16/10 ,  G01N33/569 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒S1D片段蛋白的编码基因，其核苷酸序列如SEQID NO:1所示。本发明利用密码子优化后的S1D片段蛋白的编码基因，建立了一种大量表达猪流行性腹泻病毒S1D片段蛋白的制备方法，利用该制备方法可以高效表达S1D片段蛋白，纯度高，生物学活性好，利用其制备得到单克隆抗体效价高、特异性强；作为抗原建立的乳清IgA ELISA检测方法重复性、敏感性和特异性均良好。

公开(公告)号：CN108754019A

公开(公告)日：2018-11-06

申请号：CN201810532731.9

申请日：2018-05-29

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 郭霄峰 ,  莫梅君 ,  邝燕齐

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11

CPC classification number: C12Q1/701 ,  C12Q1/686 ,  C12Q2521/107

Abstract: 本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒ORF1基因全序列的扩增方法，扩增方法中涉及8对引物，各引物对上下游引物依次如SEQ ID NO.1～16。具体扩增步骤为提取PEDV总RNA，反转成cDNA，用所述8对引物进行扩增反应，将PCR产物连接到克隆载体pTA2 Vector中，转化TOP10感受态细胞，选取阳性克隆，测序鉴定，最后拼接序列，得到ORF1基因组全序列。可以通过该方法扩增获取病料中猪流行性腹泻病毒变异株的ORF1基因，并可以捕获猪流行性腹泻病毒变异株在细胞培养传代过程中基因序列的变化。也可以作为一种检测病料中PEDV的方法，并为PEDV的ORF1基因相关研究奠定基础。