公开(公告)号：CN108753775B

公开(公告)日：2021-08-24

申请号：CN201810421083.X

申请日：2018-05-04

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 杨世华 ,  方志浩 ,  邓英华

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/90 ,  C12N9/22

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种靶向APOBEC3G基因的sgRNA及食蟹猴APOBEC3G基因敲除的方法。本发明针对食蟹猴APOBEC3G基因的mRNA确立靶序列并合成相应的sgRNA，然后构建敲除载体，共转染食蟹猴胚胎成纤维细胞，获得APOBEC3G基因敲除的食蟹猴胚胎成纤维细胞，或将sgRNA和Cas9 mRNA混合注射入食蟹猴胚胎，得到APOBEC3G基因敲除的食蟹猴胚胎。本发明经敲除效果检测鉴定，能有效在食蟹猴细胞和食蟹猴胚胎上实现APOBEC3G基因的基因敲除，为建立艾滋病动物模型奠定了坚实基础。

公开(公告)号：CN108753775A

公开(公告)日：2018-11-06

申请号：CN201810421083.X

申请日：2018-05-04

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 杨世华 ,  方志浩 ,  邓英华

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/90 ,  C12N9/22

CPC classification number: C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  C12N15/907 ,  C12N2310/10

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种靶向APOBEC3G基因的sgRNA及食蟹猴APOBEC3G基因敲除的方法。本发明针对食蟹猴APOBEC3G基因的mRNA确立靶序列并合成相应的sgRNA，然后构建敲除载体，共转染食蟹猴胚胎成纤维细胞，获得APOBEC3G基因敲除的食蟹猴胚胎成纤维细胞，或将sgRNA和Cas9 mRNA混合注射入食蟹猴胚胎，得到APOBEC3G基因敲除的食蟹猴胚胎。本发明经敲除效果检测鉴定，能有效在食蟹猴细胞和食蟹猴胚胎上实现APOBEC3G基因的基因敲除，为建立艾滋病动物模型奠定了坚实基础。

公开(公告)号：CN105755127A

公开(公告)日：2016-07-13

申请号：CN201610173177.0

申请日：2016-03-23

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 杨世华 ,  张文辉 ,  邓英华 ,  吴绮琪 ,  黄群山

IPC: C12Q1/68

CPC classification number: C12Q1/6848 ,  C12Q1/6806 ,  C12Q2549/119 ,  C12Q2521/537

Abstract: 本发明公开了一种非人灵长类动物囊胚基因敲除的鉴定方法，属于生物技术领域。本发明的具体鉴定方案为：1.提取囊胚单细胞；2.提取基因组DNA；3.通过Nested PCR扩增目的基因片段；4.回收目的基因；5.目的基因通过连接到骨架载体，转化感受态细胞后涂布到铺有LB固体培养基的培养皿；6.测序验证基因敲除结果。本发明的方法鉴定非人灵长类动物的囊胚基因敲除结果后，再将囊胚移植给代孕动物，可提高出生动物基因敲除的效率；缩减了实验使用受精卵的数量，降低了实验经费；为濒危的珍稀灵长类动物转基因技术研究提供经验借鉴。