公开(公告)号：CN118308393A

公开(公告)日：2024-07-09

申请号：CN202410504378.9

申请日：2024-04-25

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 王声斌 ,  钟贵娟 ,  王志鹏 ,  彭阳选 ,  赵芙蓉 ,  吴浩腾 ,  周艳

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/65 ,  C12N15/54 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种大肠杆菌无抗生素抗性标记的表达系统及其构建方法与应用，属于生物工程技术领域。所述表达系统以sfp基因作为筛选标记，本发明在大肠杆菌表达系统中去除了抗生素筛选基因，在重组蛋白表达过程中无需加入抗生素提供选择压力，避免了抗生素基因在环境和生物中传播，且保证了表达质粒能在宿主菌株中稳定传代。去除抗生素基因后，减少了宿主细胞的负担。本发明同时优化了大肠杆菌表达重组蛋白的方式，该法在重组蛋白表达过程中无需加入诱导物，是生产重组蛋白的大肠杆菌表达系统领域的技术进步。

公开(公告)号：CN116555308A

公开(公告)日：2023-08-08

申请号：CN202310396886.5

申请日：2023-04-14

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 王声斌 ,  林梓煌 ,  牛放 ,  王志鹏 ,  赵芙蓉 ,  彭阳选

IPC: C12N15/62 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C07K19/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种促进目标蛋白在大肠杆菌细胞外分泌表达的表达载体，至少包含：(1)目标蛋白编码序列和YebF蛋白编码序列，目标蛋白编码序列与YebF蛋白编码序列通过TEV酶切识别位点编码序列连接；(2)DsbA、DsbC和SecM蛋白编码基因。本发明根据大肠杆菌分泌表达的特点，设计了一个YebF融合标签，可用于引导目的蛋白跨细胞质膜及外膜实现细胞外表达，同时在其C‑末端设置TEV酶的氨基酸识别位点，方便后续目的蛋白的回收与纯化，同时共表达Dsb家族蛋白与SecM蛋白，可以明显提高目标蛋白的分泌表达量。

公开(公告)号：CN116426558A

公开(公告)日：2023-07-14

申请号：CN202310396832.9

申请日：2023-04-14

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 王声斌 ,  黄文彬 ,  彭阳选 ,  赵芙蓉 ,  牛放 ,  王志鹏

IPC: C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12N15/62 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种硫氧还蛋白介导重组蛋白在大肠杆菌胞外分泌表达的方法，构建表达由OmpA信号肽、TrxA蛋白和目标蛋白组成的融合蛋白的表达载体，将构建的表达载体转入大肠杆菌中进行表达培养。本发明设计信号肽和融合标签TrxA与目的蛋白进行表达，该融合标签TrxA可引导目的蛋白跨大肠杆菌的外膜分泌于培养基上清中，实现了重组蛋白的胞外表达。

公开(公告)号：CN118356911A

公开(公告)日：2024-07-19

申请号：CN202410504125.1

申请日：2024-04-25

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 王声斌 ,  牛放 ,  王志鹏 ,  赵芙蓉 ,  彭阳选 ,  周艳 ,  吴浩腾

IPC: B01J20/24 ,  B01J20/30 ,  B01J20/28 ,  C07K17/10 ,  C07K17/14

Abstract: 本发明公开了一种四氧化三铁壳聚糖微球的制备方法及蛋白质的固定方法，其中，四氧化三铁壳聚糖微球的制备方法包括使用特定浓度的戊二醛作为交联剂，把壳聚糖和四氧化三铁交联起来，壳聚糖均匀牢靠的把四氧化三铁粒子进行包裹，经过一段时间孵化后最后形成圆润微球；蛋白固定方法包括微球修饰和融合蛋白的修饰。本发明微球以磁性的四氧化三铁为内核，可以依靠系统外部的磁力从反应体系中快速分离，方便快捷、简单高效；建立了基于标签ACP提供巯基的融合蛋白生产方法，固定化过程不依赖于目的蛋白，具有蛋白质固定的通用性，且可便于多种相关蛋白质(酶)的共固定。