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公开(公告)号：CN105647855A
公开(公告)日：2016-06-08
申请号：CN201610088028.4
申请日：2016-02-16
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N5/076
CPC classification number: C12N5/061 , C12N2509/10
Abstract: 本发明公开了一种新生仔猪睾丸生殖干细胞(mGSCs)的高效获取方法，其包括以下步骤：通过两步酶法消化获取新生仔猪的睾丸组织单细胞悬液；利用差速贴壁法去除睾丸组织中成纤维类的贴壁细胞；差速贴壁5次以后，收集未贴壁细胞，所述未贴壁细胞中含有淋巴细胞、红细胞和mGSCs；利用密度梯度离心方法将淋巴细胞和红细胞与mGSCs分离，即得到高纯度的mGSCs。本发明的方法操作简单，重复性好，成功率高，高效的获取高比例的mGSCs，对于后期研究mGSCs性质及其应用具有重要作用。不仅可应用于猪mGSCs生物学性质研究的科研平台、也可以在猪mGSCs介导的动物育种、品种改良和濒危品种保存等方面具有潜在的应用前景。
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公开(公告)号：CN105624101A
公开(公告)日：2016-06-01
申请号：CN201610087392.9
申请日：2016-02-16
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N5/076
CPC classification number: C12N5/061 , C12N2500/32 , C12N2500/40 , C12N2500/44 , C12N2500/84 , C12N2501/31 , C12N2506/04
Abstract: 本发明公开了一种猪生殖干细胞体外分化精子的建立方法，其包括步骤：仔猪睾丸组织经分离培养，获取原代仔猪睾丸组织成纤维细胞和生殖干细胞；采用构建体外诱导精子分化的“Niche”的培养基培养睾丸组织成纤维细胞15天，得到体外诱导精子分化的“Niche”饲养层；将生殖干细胞接种至“Niche”饲养层上，培养27～30天，经细胞生物学分析，体外获得单倍体精子样细胞。本发明方法操作简单，重复性好，是猪mGSCs体外分化研究的一项重要突破，这项发明对于猪胚胎体外操作和转基因育种研究将提供重要的基础技术，同时对于其他物种精子体外分化和人类辅助生殖的研究也具有重要的参考价值。
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公开(公告)号：CN102311941A
公开(公告)日：2012-01-11
申请号：CN201110272928.1
申请日：2011-09-15
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N5/076
Abstract: 本发明公开了一种机械法分离培养猪精原干细胞的方法。本发明所述方法是结合动物睾丸组织的特点，采用机械法分离后将组织块进行培养，丰富了现有精原干细胞的分离纯化方法。本发明所述方法不用通过酶消化就能获得猪精原干细胞，细胞克隆快，状态好，解决了精原干细胞分离难、数量少、培养条件要求高等问题，比起现有的分离技术，本发明方法操作简单，降低了获得细胞的难度，大大降低了实验成本，提高了实验成功率，应该在本领域进行推广。
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公开(公告)号：CN104673742B
公开(公告)日：2017-12-29
申请号：CN201510065430.6
申请日：2015-02-06
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N5/071
Abstract: 本发明公开了一种长白仔猪睾丸支持细胞永生系的建立方法，包括步骤：取长白仔猪睾丸组织，获取高比例的长白仔猪睾丸支持细胞以后，完全培养基培养1～2h后更换新鲜培养液，继续培养，最后传代至细胞形态均一的F3代的睾丸成纤维细胞；利用携带Large T和Egfp基因的慢病毒液侵染成纤维细胞，获得特征的并且表达Egfp和支持细胞标记的细胞株；使用优化的培养液培养传代超过50代以后，获得长白仔猪睾丸支持细胞永生系。本发明的长白仔猪睾丸支持细胞永生系体外传代次数已超过90代，对比市场上已建立猪睾丸传代ST细胞，本发明永生化的长白仔猪支持细胞系维持了原代的支持细胞生物学特征，更适合支持细胞的生物学性质研究，可以应用于疫苗开发和药物筛选等方面研究。
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公开(公告)号：CN102417893B
公开(公告)日：2013-07-31
申请号：CN201110272927.7
申请日：2011-09-15
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N5/076
Abstract: 本发明公开了一种一步酶法分离培养猪精原干细胞的方法以及培养体系。本发明方法通过采用一步酶法来分离消化猪精原干细胞，替代目前主要采用的两步酶消化方法，该方法获得细胞容易，培养时间短，细胞增殖快、状态好。通过本发明方法，解决了目前精原干细胞分离难、数量少、增殖慢、培养要求高的问题，为快速获取大量猪精原干细胞提供了一种新的方法。而且本方法操作简便，实验成本低，降低了实验失败的风险，易于推广应用。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102311941B
公开(公告)日：2013-06-19
申请号：CN201110272928.1
申请日：2011-09-15
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N5/076
Abstract: 本发明公开了一种机械法分离培养猪精原干细胞的方法。本发明所述方法是结合动物睾丸组织的特点，采用机械法分离后将组织块进行培养，丰富了现有精原干细胞的分离纯化方法。本发明所述方法不用通过酶消化就能获得猪精原干细胞，细胞克隆快，状态好，解决了精原干细胞分离难、数量少、培养条件要求高等问题，比起现有的分离技术，本发明方法操作简单，降低了获得细胞的难度，大大降低了实验成本，提高了实验成功率，应该在本领域进行推广。
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公开(公告)号：CN105624105B
公开(公告)日：2020-01-21
申请号：CN201610087719.2
申请日：2016-02-16
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N5/0775
Abstract: 本发明公开了一种猪睾丸间质祖细胞PLCs的长期培养方法，其中包括体外分离、检测和分化，利用猪PLCs的体外增殖培养基培养仔猪睾丸成纤维细胞5～8天后，得到PLCs克隆集落；利用猪PLCs的分化培养基进行培养后，第3天PLCs开始向成熟睾丸间质细胞分化，然而在增殖培养基中培养，在体外最长维持时间达到了6个月。本发明首次建立起一套成熟的猪PLCs的分离、培养、检测和分化的完善方法，最终确立的不同体外培养体系可以实现控制PLCs在体外维持增殖和分化。本发明的方法对于体外研究PLCs生物学性质，以及药物研发和疫苗生产等方面应用具有潜在应用价值。
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公开(公告)号：CN105624105A
公开(公告)日：2016-06-01
申请号：CN201610087719.2
申请日：2016-02-16
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N5/0775
Abstract: 本发明公开了一种猪睾丸间质祖细胞PLCs的长期培养方法，其中包括体外分离、检测和分化，利用猪PLCs的体外增殖培养基培养仔猪睾丸成纤维细胞5～8天后，得到PLCs克隆集落；利用猪PLCs的分化培养基进行培养后，第3天PLCs开始向成熟睾丸间质细胞分化，然而在增殖培养基中培养，在体外最长维持时间达到了6个月。本发明首次建立起一套成熟的猪PLCs的分离、培养、检测和分化的完善方法，最终确立的不同体外培养体系可以实现控制PLCs在体外维持增殖和分化。本发明的方法对于体外研究PLCs生物学性质，以及药物研发和疫苗生产等方面应用具有潜在应用价值。
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公开(公告)号：CN104673742A
公开(公告)日：2015-06-03
申请号：CN201510065430.6
申请日：2015-02-06
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N5/071
Abstract: 本发明公开了一种长白仔猪睾丸支持细胞永生系的建立方法，包括步骤：取长白仔猪睾丸组织，获取高比例的长白仔猪睾丸支持细胞以后，完全培养基培养1～2h后更换新鲜培养液，继续培养，最后传代至细胞形态均一的F3代的睾丸成纤维细胞；利用携带Large T和Egfp基因的慢病毒液侵染成纤维细胞，获得特征的并且表达Egfp和支持细胞标记的细胞株；使用优化的培养液培养传代超过50代以后，获得长白仔猪睾丸支持细胞永生系。本发明的长白仔猪睾丸支持细胞永生系体外传代次数已超过90代，对比市场上已建立猪睾丸传代ST细胞，本发明永生化的长白仔猪支持细胞系维持了原代的支持细胞生物学特征，更适合支持细胞的生物学性质研究，可以应用于疫苗开发和药物筛选等方面研究。
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公开(公告)号：CN105018430B
公开(公告)日：2018-08-31
申请号：CN201510065393.9
申请日：2015-02-06
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N5/10 , C12N15/867 , A61K35/28 , A61K39/00 , A61P43/00
Abstract: 本发明公开了一种长白仔猪骨髓间充质干细胞永生系的建立方法，包括步骤：取长白小公猪的骨髓细胞，培养液培养20‑28h后更换新鲜培养液，继续培养，传代至获得细胞形态均一的F3代的长白仔猪bMSCs；利用携带LargeT慢病毒液侵染F3代的长白仔猪bMSCs，细胞筛选，传代至得到稳定表达Egfp的细胞株；将稳定表达Egfp的细胞株，传代50代以上，经细胞生物学分析检测，获得长白仔猪骨髓间充质干细胞永生系。本发明获得了能支持猪bMSCs稳定培养的系统，促使细胞体外快速稳定增殖，并维持原代的生物学特征，证明得到了永生的长白仔猪bMSCs，可以深入研究猪bMSCs生物学性质和应用于药物或疫苗研发。
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