公开(公告)号：CN113930375B

公开(公告)日：2023-08-18

申请号：CN202111089492.2

申请日：2021-09-16

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 张炼辉 ,  闫金利 ,  廖立胜 ,  王小晴

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/74 ,  C12N15/31 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种无痕敲除青枯菌基因的方法及其应用。本发明通过构建待敲除的目的基因的融合片段，将融合片段转入青枯菌感受态细胞获得带有FRT位点和抗生素抗性的目的基因敲除突变体，再通过构建辅助质粒转入敲除突变体进行传代培养，消除抗生素抗性的方法，实现了青枯菌基因的无痕敲除。本发明所述基因敲除方法较传统的双亲或三亲本杂交方法具有操作简便，准确率较高等优点，敲除过程中无需构建目的基因的重组质粒，还避免了双亲或三亲本交配转化效率低、蔗糖自杀质粒自杀不完全与质粒DNA滞留于突变体基因组中等弊端。本发明所述无痕敲除基因的方法还可用于敲除不同寄主的青枯菌菌株中的不同基因，适用范围广。

公开(公告)号：CN113930375A

公开(公告)日：2022-01-14

申请号：CN202111089492.2

申请日：2021-09-16

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 张炼辉 ,  闫金利 ,  廖立胜 ,  王小晴

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/74 ,  C12N15/31 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种无痕敲除青枯菌基因的方法及其应用。本发明通过构建待敲除的目的基因的融合片段，将融合片段转入青枯菌感受态细胞获得带有FRT位点和抗生素抗性的目的基因敲除突变体，再通过构建辅助质粒转入敲除突变体进行传代培养，消除抗生素抗性的方法，实现了青枯菌基因的无痕敲除。本发明所述基因敲除方法较传统的双亲或三亲本杂交方法具有操作简便，准确率较高等优点，敲除过程中无需构建目的基因的重组质粒，还避免了双亲或三亲本交配转化效率低、蔗糖自杀质粒自杀不完全与质粒DNA滞留于突变体基因组中等弊端。本发明所述无痕敲除基因的方法还可用于敲除不同寄主的青枯菌菌株中的不同基因，适用范围广。