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发明公开
一种基于APEX2邻近标记技术探索前导链与后随链周围蛋白的方法审中-实审

公开(公告)号：CN118259002A

公开(公告)日：2024-06-28

申请号：CN202410467103.2

申请日：2024-04-18

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 姜玖颃 , 梁晓欢

IPC: G01N33/573 , G01N30/02 , G01N30/72 , G01N33/58 , C12N15/62 , C12N15/85

Abstract: 本发明公开了一种基于APEX2邻近标记技术探索前导链与后随链周围蛋白的方法，为选择DNA复制前导链和后随链相关的关键蛋白作为靶标构建含有EFIα启动子序列、APEX2以及V5的融合蛋白载体，再转化到宿主细胞系形成融合细胞系，通过生物素‑苯酚以及过氧化氢的处理，将邻近蛋白进行生物素标记，随后进行生物素化蛋白的提取和纯化，经过质量验证后，最后进行质谱与色谱的上机分析。本发明使用改进的APEX2邻近标记技术，克服了其他邻近技术，标记半径大，实验时间长的缺点，提高了效率。本发明改进的APEX2邻近标记技术更能适应该实验的需求，为DNA复制链周围蛋白的鉴定创造新的研究工具。

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