公开(公告)号：CN113637647A

公开(公告)日：2021-11-12

申请号：CN202110822352.5

申请日：2021-07-21

Applicant: 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司

Inventor： 方倪冉 ,  黄梅 ,  温良海 ,  徐婷 ,  杨斌

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/12 ,  C12N15/40 ,  C12N15/86

Abstract: 本发明公开了一种pSFVCs‑EGFP病毒样颗粒及其制备方法，包括：设计与合成引物：构建得到复制子质粒pSFVCs‑sp6‑EGFP；将复制子质粒pSFVCs‑sp6‑EGFP进行体外转录；再将其体外转录的mRNA共电转入BHK细胞中，得到pSFVCs‑EGFP病毒样颗粒。相应的，本发明在pSFVCs‑EGFP病毒样颗粒基础上构建了去除病毒衣壳蛋白结构的复制子质粒pSFV‑sp6‑EGFP，进而制备出病毒样颗粒pSFV‑EGFP。实施本发明，所述病毒样颗粒pSFV‑EGFP增强了EGFP蛋白的表达，成功建立了一种以塞姆利基森林病毒为载体高效表达其它重要外源蛋白的平台，为后续RNA疫苗研制奠定实验基础。

公开(公告)号：CN113549652A

公开(公告)日：2021-10-26

申请号：CN202110822407.2

申请日：2021-07-21

Applicant: 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司

Inventor： 方倪冉 ,  杨斌 ,  郑航辉 ,  杨小云 ,  董楠

IPC: C12N15/86 ,  C12N5/10 ,  C12N9/38

Abstract: 本发明公开了一种SFV‑helper质粒，其是通过构建如SEQ ID NO.1所示的重组载体，并合成如SEQ ID NO.2所示的插入片段基因，再将所述插入片段基因克隆入所述重组载体而得。相应的，本发明还提供一种pSFVCs‑LacZ病毒样颗粒及其制备方法，包括：(1)构建所述SFV‑helper质粒；(2)将pSFVCs‑LacZ、SFV‑helper质粒体外转录成mRNA，然后将mRNA共电转入BHK细胞中，得到pSFVCs‑LacZ病毒样颗粒。相应的，本发明还提供SFV‑helper质粒、pSFVCs‑LacZ病毒样颗粒的应用。实施本发明，能高效表达β‑半乳糖苷酶，并具有较好的生物安全性。

公开(公告)号：CN111621596A

公开(公告)日：2020-09-04

申请号：CN202010374676.2

申请日：2020-05-06

Applicant: 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司

Inventor： 杨斌 ,  黄红亮 ,  陈瑞爱

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明属于病毒检测技术领域，具体涉及一种猪圆环病毒3型实时荧光定量PCR检测引物探针组、试剂盒及方法。本发明首次通过在PCV3 cap蛋白上设计引物增强了检测的准确性；该检测方法实现了全闭管式操作，减少了假阳性现象的出现，同时TaqMan探针技术的高特异性和光谱技术的高敏感性既克服了常规PCR技术只能实现定性检测的不足，又解决了SYBR Green法特异性不强等缺点，更加适应临床检测；该方法灵敏度高，特异性和重复性较好，最低检测下限为11.8拷贝/μL，与其他荧光定量PCR检测方法相比检测更灵敏。

公开(公告)号：CN113652405B

公开(公告)日：2025-03-18

申请号：CN202110968210.X

申请日：2021-08-23

Applicant: 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司

Inventor： 方倪冉 ,  郑航辉 ,  温良海 ,  杨斌 ,  徐婷

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/34 ,  C12N15/86 ,  C07K14/01 ,  A61K39/12 ,  A61P31/20

Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，公开了一种pSFV‑p54复制子颗粒及其制备方法与应用。所述pSFV‑p54复制子颗粒的制备方法，包括以下步骤：(1)以pSFV‑sp6‑EGFP质粒和flag‑p54基因为材料，构建得到pSFV‑sp6‑p54质粒；所述flag‑p54基因如SEQ ID NO：1所示；(2)分别将SFV‑helper辅助质粒和所述pSFV‑sp6‑p54质粒线性化并进行体外转录，将所得mRNA共电转入BHK细胞或Vero细胞中，得到pSFV‑p54复制子颗粒。本发明通过以塞姆利基森林病毒为载体，插入非洲猪瘟p54基因，所制得的pSFV‑p54复制子颗粒能够高效表达非洲猪瘟病毒p54蛋白，且具有较高的生物安全性，可应用于研制非洲猪瘟相关疫苗。

公开(公告)号：CN113652405A

公开(公告)日：2021-11-16

申请号：CN202110968210.X

申请日：2021-08-23

Applicant: 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司

Inventor： 方倪冉 ,  郑航辉 ,  温良海 ,  杨斌 ,  徐婷

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/34 ,  C12N15/86 ,  C07K14/01 ,  A61K39/12 ,  A61P31/20

Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，公开了一种pSFV‑p54复制子颗粒及其制备方法与应用。所述pSFV‑p54复制子颗粒的制备方法，包括以下步骤：(1)以pSFV‑sp6‑EGFP质粒和flag‑p54基因为材料，构建得到pSFV‑sp6‑p54质粒；所述flag‑p54基因如SEQ ID NO：1所示；(2)分别将SFV‑helper辅助质粒和所述pSFV‑sp6‑p54质粒线性化并进行体外转录，将所得mRNA共电转入BHK细胞或Vero细胞中，得到pSFV‑p54复制子颗粒。本发明通过以塞姆利基森林病毒为载体，插入非洲猪瘟p54基因，所制得的pSFV‑p54复制子颗粒能够高效表达非洲猪瘟病毒p54蛋白，且具有较高的生物安全性，可应用于研制非洲猪瘟相关疫苗。