公开(公告)号：CN101358195A

公开(公告)日：2009-02-04

申请号：CN200810048124.1

申请日：2008-06-23

Applicant: 华中科技大学

Inventor： 闫云君 ,  杨江科 ,  刘云 ,  贾彬 ,  徐莉

IPC: C12N15/52 ,  C12N15/55 ,  C12N15/56 ,  C12N15/63 ,  C12N15/78 ,  C12N1/21 ,  C12R1/38

Abstract: 本发明提供一种洋葱假单胞菌基因工程菌的构建方法，将T7 RNA聚合酶基因替换洋葱假单胞菌G63基因组中脂肪酶及其伴侣基因，使T7 RNA聚合酶基因整合到洋葱假单胞菌基因组中并位于脂肪酶启动子的调控之下。然后将洋葱假单胞菌脂肪酶及其伴侣基因克隆到含有T7启动子和LacI阻遏蛋白的表达质粒中，最后把质粒导入洋葱假单胞菌重组菌中得到洋葱假单胞菌脂肪脂肪酶超级工程菌。本发明对洋葱假单胞菌G63进行基因改造，获得了的超级工程菌基具有较高的表达量和催化活力，并且具有较好的低碳醇耐受性以及耐高温性。

公开(公告)号：CN103571784B

公开(公告)日：2015-07-22

申请号：CN201310403064.1

申请日：2013-09-08

Applicant: 华中科技大学

Inventor： 闫云君 ,  贾彬 ,  徐莉 ,  张后今

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/113 ,  C12N15/74 ,  C12N9/20 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明提供了一种表达生物柴油专用脂肪酶的工程菌及其发酵工艺。本发明采用洋葱伯克霍尔德菌GJ (B. cenocepacia)为原始菌，通过荧光型启动子探针载体从其中筛选组成型强启动子Pcon，将不含启动子的T7 RNA聚合酶基因克隆在启动子Pcon，经电转化将二者导入原始菌中获得宿主菌，再将脂肪酶基因克隆到通用载体pBBR22b中得脂肪酶表达质粒，经电转化将脂肪酶表达质粒导入宿主菌中获得脂肪酶工程菌Burkholderia cenocepacia MTPF），CCTCC NO: M 2013229。本发明能大大提高脂肪酶的表达量，生产的脂肪酶有较好的催化活力，低碳醇耐受性以及耐高温性。

公开(公告)号：CN103571784A

公开(公告)日：2014-02-12

申请号：CN201310403064.1

申请日：2013-09-08

Applicant: 华中科技大学

Inventor： 闫云君 ,  贾彬 ,  徐莉 ,  张后今

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/113 ,  C12N15/74 ,  C12N9/20 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明提供了一种表达生物柴油专用脂肪酶的工程菌及其发酵工艺。本发明采用洋葱伯克霍尔德菌GJ(B.cenocepacia)为原始菌，通过荧光型启动子探针载体从其中筛选组成型强启动子Pcon，将不含启动子的T7RNA聚合酶基因克隆在启动子Pcon，经电转化将二者导入原始菌中获得宿主菌，再将脂肪酶基因克隆到通用载体pBBR22b中得脂肪酶表达质粒，经电转化将脂肪酶表达质粒导入宿主菌中获得脂肪酶工程菌BurkholderiacenocepaciaMTPF），CCTCC NO:M2013229。本发明能大大提高脂肪酶的表达量，生产的脂肪酶有较好的催化活力，低碳醇耐受性以及耐高温性。