公开(公告)号：CN112662738B

公开(公告)日：2023-03-21

申请号：CN202011645412.2

申请日：2020-12-31

Applicant: 华中科技大学

Inventor： 杨杰 ,  吴飒 ,  曹冬建 ,  奚彩丽

IPC: C12Q1/6806 ,  C12Q1/6841 ,  C12Q1/682 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明提供了一种用于核酸原位杂交信号放大的单链DNA制备方法，属于分子生物学技术领域。所述制备方法包括：以基因识别引物、第一磷酸化环化引物和DNA连接酶为原料，进行连接反应；连接反应完成后加入Bst DNA聚合酶和dNTP，进行滚环扩增反应，反应温度为45‑55℃，反应时间为1‑3h，获得用于核酸原位杂交信号放大的单链DNA；其中，所述第一磷酸化环化引物包含片段C，所述C的局部片段与第一荧光探针的核酸片段序列相同；或者，所述C的局部片段与二级放大单链DNA的局部片段核苷酸序列相同。该方法具有经济实用、步骤简单和灵敏度高的优点。本发明还提供一种用于核酸原位杂交信号二级放大的单链DNA制备方法。

公开(公告)号：CN112662738A

公开(公告)日：2021-04-16

申请号：CN202011645412.2

申请日：2020-12-31

Applicant: 华中科技大学

Inventor： 杨杰 ,  吴飒 ,  曹冬建 ,  奚彩丽

IPC: C12Q1/6806 ,  C12Q1/6841 ,  C12Q1/682 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明提供了一种用于核酸原位杂交信号放大的单链DNA制备方法，属于分子生物学技术领域。所述制备方法包括：以基因识别引物、第一磷酸化环化引物和DNA连接酶为原料，进行连接反应；连接反应完成后加入Bst DNA聚合酶和dNTP，进行滚环扩增反应，反应温度为45‑55℃，反应时间为1‑3h，获得用于核酸原位杂交信号放大的单链DNA；其中，所述第一磷酸化环化引物包含片段C，所述C的局部片段与第一荧光探针的核酸片段序列相同；或者，所述C的局部片段与二级放大单链DNA的局部片段核苷酸序列相同。该方法具有经济实用、步骤简单和灵敏度高的优点。本发明还提供一种用于核酸原位杂交信号二级放大的单链DNA制备方法。