公开(公告)号：CN117947143B

公开(公告)日：2024-06-18

申请号：CN202410037308.7

申请日：2024-01-10

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 陈翊平 ,  张小妹 ,  王绪丰

IPC: C12Q1/6816 ,  C12Q1/6806 ,  C12Q1/10 ,  C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  C12N15/11 ,  C12R1/42

Abstract: 本发明属于微生物检测技术领域，具体涉及一种免提取、免扩增、高灵敏度的活菌定量检测方法及其应用，用于无需核酸提取和扩增即可高灵敏定量检测活菌。所述免提取是指不需要蛋白酶处理，利用噬菌体直接将靶标菌株核酸从活细胞中释放出来，其中涉及的活菌检测提高了检测准确性，涉及的免提取简化了试验操作并降低了成本；本发明采用DNA和ATP协同触发PfAgo酶切割荧光探针实现信号增强，无需对靶标菌株核酸进行扩增即可实现高灵敏检测，避免了交叉污染的风险；本发明中PfAgo酶引导链的设计和目标序列选择不受PAM限制，降低了引物设计复杂性；本发明方法线性范围为102‑107 CFU/mL，检出限为20 CFU/mL，检测灵敏度高，检测结果准确，适用于食源性病原菌的活菌定量检测。

公开(公告)号：CN117947143A

公开(公告)日：2024-04-30

申请号：CN202410037308.7

申请日：2024-01-10

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 陈翊平 ,  张小妹 ,  王绪丰

IPC: C12Q1/6816 ,  C12Q1/6806 ,  C12Q1/10 ,  C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  C12N15/11 ,  C12R1/42

Abstract: 本发明属于微生物检测技术领域，具体涉及一种免提取、免扩增、高灵敏度的活菌定量检测方法及其应用，用于无需核酸提取和扩增即可高灵敏定量检测活菌。所述免提取是指不需要蛋白酶处理，利用噬菌体直接将靶标菌株核酸从活细胞中释放出来，其中涉及的活菌检测提高了检测准确性，涉及的免提取简化了试验操作并降低了成本；本发明采用DNA和ATP协同触发PfAgo酶切割荧光探针实现信号增强，无需对靶标菌株核酸进行扩增即可实现高灵敏检测，避免了交叉污染的风险；本发明中PfAgo酶引导链的设计和目标序列选择不受PAM限制，降低了引物设计复杂性；本发明方法线性范围为102‑107 CFU/mL，检出限为20 CFU/mL，检测灵敏度高，检测结果准确，适用于食源性病原菌的活菌定量检测。