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公开(公告)号：CN112630420B
公开(公告)日：2022-10-14
申请号：CN202011419566.X
申请日：2020-12-07
Applicant: 北京科技大学
IPC: G01N33/531 , G01N33/533 , G01N33/577 , G01N33/58 , G01N33/53 , G01N33/543 , G01N33/68 , G01N33/558
Abstract: 本发明涉及生化合成领域，提供了一种利用抗体的糖基和固相载体材料实现定向偶联的方法、定向偶联物及应用，所述方法利用修饰试剂对固相载体材料进行修饰，使固相载体材料表面修饰具有一定长度且富含氨基的结合臂，结合臂能伸进抗体Fc区内并与抗体的糖基反应；然后将抗体的糖基氧化成醛基；醛基与修饰后的固相载体材料的氨基反应形成席夫碱，将席夫碱还原成胺类化合物，即得定向偶联物。本发明解决了固相载体材料难与抗体内糖基偶联的问题；并解决了抗体与固相载体材料随机固定的问题，抗体与抗原结合的活性部位能充分暴露出来；将本发明构建的定向偶联物应用于免疫分析中，只需较少的定向偶联物就能识别更多的抗原，提高免疫分析测定的灵敏度。
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公开(公告)号：CN111044731B
公开(公告)日：2021-05-07
申请号：CN201911315460.2
申请日：2019-12-19
Applicant: 北京科技大学
IPC: G01N33/68 , G01N33/577 , C07K1/14
Abstract: 一种脉冲温育免疫反应分离富集多肽药物中肽类杂质的方法，属于生化分析领域。利用两种偶联有针对多肽不同抗原决定簇的抗体的免疫亲和磁珠，在一定的脉冲温育条件下，依次对含有杂质的多肽溶液中的多肽杂质进行结合捕获，使之与杂质分离，将磁分离后上清液中的肽类杂质用固相萃取柱进行富集，同时脱盐，洗脱后用于色谱质谱分析。本发明大幅减少结构类似杂质被同时萃取的可能；萃取过程中采用脉冲温育，通过反应温度的变化使结合在抗体上结合力相对较弱的杂质被结合力较强主成分所替代，进一步减少了杂质被同时萃取的可能，使得分离效率更高。分离后的杂质经固相萃取柱浓缩脱盐，冻干、复溶后可用液相色谱质谱对肽类杂质进行定性、定量分析。
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公开(公告)号：CN112630420A
公开(公告)日：2021-04-09
申请号：CN202011419566.X
申请日：2020-12-07
Applicant: 北京科技大学
IPC: G01N33/531 , G01N33/533 , G01N33/577 , G01N33/58 , G01N33/53 , G01N33/543 , G01N33/68 , G01N33/558
Abstract: 本发明涉及生化合成领域，提供了一种利用抗体的糖基和固相载体材料实现定向偶联的方法、定向偶联物及应用，所述方法利用修饰试剂对固相载体材料进行修饰，使固相载体材料表面修饰具有一定长度且富含氨基的结合臂，结合臂能伸进抗体Fc区内并与抗体的糖基反应；然后将抗体的糖基氧化成醛基；醛基与修饰后的固相载体材料的氨基反应形成席夫碱，将席夫碱还原成胺类化合物，即得定向偶联物。本发明解决了固相载体材料难与抗体内糖基偶联的问题；并解决了抗体与固相载体材料随机固定的问题，抗体与抗原结合的活性部位能充分暴露出来；将本发明构建的定向偶联物应用于免疫分析中，只需较少的定向偶联物就能识别更多的抗原，提高免疫分析测定的灵敏度。
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公开(公告)号：CN111044731A
公开(公告)日：2020-04-21
申请号：CN201911315460.2
申请日：2019-12-19
Applicant: 北京科技大学
IPC: G01N33/68 , G01N33/577 , C07K1/14
Abstract: 一种脉冲温育免疫反应分离富集多肽药物中肽类杂质的方法，属于生化分析领域。利用两种偶联有针对多肽不同抗原决定簇的抗体的免疫亲和磁珠，在一定的脉冲温育条件下，依次对含有杂质的多肽溶液中的多肽杂质进行结合捕获，使之与杂质分离，将磁分离后上清液中的肽类杂质用固相萃取柱进行富集，同时脱盐，洗脱后用于色谱质谱分析。本发明大幅减少结构类似杂质被同时萃取的可能；萃取过程中采用脉冲温育，通过反应温度的变化使结合在抗体上结合力相对较弱的杂质被结合力较强主成分所替代，进一步减少了杂质被同时萃取的可能，使得分离效率更高。分离后的杂质经固相萃取柱浓缩脱盐，冻干、复溶后可用液相色谱质谱对肽类杂质进行定性、定量分析。
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