一种使用多内参基因组合研究胡杨基因的方法

    公开(公告)号:CN103898223B

    公开(公告)日:2016-04-20

    申请号:CN201410138911.0

    申请日:2014-04-08

    Abstract: 本发明公开了一种使用多内参基因组合研究胡杨基因的方法,包括如下步骤:(1)提取胡杨的总RNA,反转录为cDNA,作为PCR的模板;(2)使用大于等于9个内参基因,设计特异性引物在实时荧光定量PCR仪上选择SYBR Green法进行反应,得到CT值;(3)通过公式和geNorm软件的PV值计算功能,以0.15为阈值确定内参基因的数目;(4)根据所需数目选择内参基因,和目的基因一起进行qRT-PCR反应,将得到的CT值通过geNorm软件,计算得到目的基因在每个处理下用多内参基因组合得到相对表达量的变化数据。本发明所述方法与传统的单一内参基因方法相比,能够得到更为可靠的结论。

    在三倍体毛白杨中开展高效基因编辑的方法

    公开(公告)号:CN118256551B

    公开(公告)日:2024-11-15

    申请号:CN202311295558.2

    申请日:2023-10-09

    Abstract: 本发明属于植物基因工程领域,公开了一种在三倍体毛白杨中开展高效基因编辑的方法。包括如下步骤:1)通过分析基因组结构特点,设计精准的gRNA,合成引物;2)利用BsaI酶,再通过无缝克隆的方法将靶向目标基因的gRNA构建到基因编辑载体上;3)原生质体中进行基因编辑效率的验证;4)高效遗传转化和基因编辑,具体包括如下步骤:准备遗传转化的植株;将构建好的载体转化到农杆菌EHA105中;制备侵染重悬液:重悬液中加入石墨烯溶液;侵染三倍体毛白杨;侵染叶片和农杆菌的共同培养;抗性愈伤筛选;抗性芽的诱导、伸长、生根培养;5)利用分子检测技术对基因编辑效率进行检测。本发明建立了高效基因编辑技术体系。

    在三倍体毛白杨中开展高效基因编辑的方法

    公开(公告)号:CN118256551A

    公开(公告)日:2024-06-28

    申请号:CN202311295558.2

    申请日:2023-10-09

    Abstract: 本发明属于植物基因工程领域,公开了一种在三倍体毛白杨中开展高效基因编辑的方法。包括如下步骤:1)通过分析基因组结构特点,设计精准的gRNA,合成引物;2)利用BsaI酶,再通过无缝克隆的方法将靶向目标基因的gRNA构建到基因编辑载体上;3)原生质体中进行基因编辑效率的验证;4)高效遗传转化和基因编辑,具体包括如下步骤:准备遗传转化的植株;将构建好的载体转化到农杆菌EHA105中;制备侵染重悬液:重悬液中加入石墨烯溶液;侵染三倍体毛白杨;侵染叶片和农杆菌的共同培养;抗性愈伤筛选;抗性芽的诱导、伸长、生根培养;5)利用分子检测技术对基因编辑效率进行检测。本发明建立了高效基因编辑技术体系。

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