公开(公告)号：CN102517313B

公开(公告)日：2014-04-09

申请号：CN201110416641.1

申请日：2011-12-14

Applicant: 北京工业大学

Inventor： 盛望 ,  陈学斌 ,  杨志平 ,  曾毅 ,  李泽琳

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明公开了一种用于表达miRNA和/或蛋白的表达载体及其应用。本发明所提供的表达载体是由线性载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR和两端各有一个粘性末端的双链DNA片段连接而成的环状表达载体；所述线性载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR的两个末端和所述双链DNA片段的两个粘性末端相连，并且两个连接处均形成限制性内切酶BsmB I的识别位点；所述DNA片段的内部还包括限制性内切酶Dra I的识别位点。实验证明，在表达miRNA方面，本发明所提供的表达载体为环形载体，可在大肠杆菌中大量扩增，克服了原始线性载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR一次性使用的缺陷，大大节约了实验成本；同时，本发明所提供的表达载体还可用于表达蛋白，克服了普通载体只能单一表达蛋白或表达miRNA的不足。

公开(公告)号：CN102517313A

公开(公告)日：2012-06-27

申请号：CN201110416641.1

申请日：2011-12-14

Applicant: 北京工业大学

Inventor： 盛望 ,  陈学斌 ,  杨志平 ,  曾毅 ,  李泽琳

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明公开了一种用于表达miRNA和/或蛋白的表达载体及其应用。本发明所提供的表达载体是由线性载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR和两端各有一个粘性末端的双链DNA片段连接而成的环状表达载体；所述线性载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR的两个末端和所述双链DNA片段的两个粘性末端相连，并且两个连接处均形成限制性内切酶BsmB I的识别位点；所述DNA片段的内部还包括限制性内切酶Dra I的识别位点。实验证明，在表达miRNA方面，本发明所提供的表达载体为环形载体，可在大肠杆菌中大量扩增，克服了原始线性载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR一次性使用的缺陷，大大节约了实验成本；同时，本发明所提供的表达载体还可用于表达蛋白，克服了普通载体只能单一表达蛋白或表达miRNA的不足。

公开(公告)号：CN102533742A

公开(公告)日：2012-07-04

申请号：CN201110425807.6

申请日：2011-12-16

Applicant: 北京工业大学

Inventor： 盛望 ,  陈学斌 ,  周邵梅 ,  曾毅 ,  李泽琳

IPC: C12N15/11 ,  C12N15/63 ,  C12N15/64

Abstract: 本发明提供一种含多克隆位点的互补双链核苷酸序列，包含该双链核苷酸序列的重组质粒，所述重组质粒的构建方法。所述双链核苷酸序列的两条单链核苷酸序列分别如式1和式2所示：5’-(X)n1GAGACC(X)n2TTTAAA(X)n3GGTCTC(X)n4-3’(式1)，5’-(Y)n5GAGACC(Y)n6TTTAAA(Y)n7GGTCTC(Y)n8-3’(式2)。包含该双链核苷酸序列的重组质粒为多用途表达载体，可以用于表达miRNA和蛋白质。

公开(公告)号：CN102533742B

公开(公告)日：2013-10-09

申请号：CN201110425807.6

申请日：2011-12-16

Applicant: 北京工业大学

Inventor： 盛望 ,  陈学斌 ,  周邵梅 ,  曾毅 ,  李泽琳

IPC: C12N15/11 ,  C12N15/63 ,  C12N15/64

Abstract: 本发明提供一种含多克隆位点的互补双链核苷酸序列，包含该双链核苷酸序列的重组质粒，所述重组质粒的构建方法。所述双链核苷酸序列的两条单链核苷酸序列分别如式1和式2所示：5’-(X)n1GAGACC(X)n2TTTAAA(X)n3GGTCTC(X)n4-3’(式1)，5’-(Y)n5GAGACC(Y)n6TTTAAA(Y)n7GGTCTC(Y)n8-3’(式2)。包含该双链核苷酸序列的重组质粒为多用途表达载体，可以用于表达miRNA和蛋白质。