一种检测膜融合蛋白在脂质体中定位的核磁共振方法

    公开(公告)号:CN112630250B

    公开(公告)日:2022-06-17

    申请号:CN202011577753.0

    申请日:2020-12-28

    Abstract: 本发明提供了一种检测膜融合蛋白在脂质体中定位的固体核磁共振方法,属于生物物理和生物化学技术领域,包括:对膜融合蛋白进行15N稳定同位素标记,将15N标记蛋白分别与顺磁脂质体和非顺磁脂质体反应,得到蛋白‑脂质体复合物。其中顺磁脂质体含有一定比例的络合镧系金属离子的顺磁磷脂分子,而非顺磁脂质体不含有顺磁磷脂分子。通过采集蛋白‑脂质体复合物的固体核磁共振谱图,对比在顺磁和非顺磁脂质体中的一维15N固体核磁共振图谱,进而利用信号强度的对比获取膜融合蛋白在脂质体中的定位,即区分膜融合蛋白在脂质体内部或在其表面。采用本发明提供的核磁共振方法能够检测膜融合蛋白在脂质体中的定位。

    一种检测膜融合蛋白在脂质体中定位的核磁共振方法

    公开(公告)号:CN112630250A

    公开(公告)日:2021-04-09

    申请号:CN202011577753.0

    申请日:2020-12-28

    Abstract: 本发明提供了一种检测膜融合蛋白在脂质体中定位的固体核磁共振方法,属于生物物理和生物化学技术领域,包括:对膜融合蛋白进行15N稳定同位素标记,将15N标记蛋白分别与顺磁脂质体和非顺磁脂质体反应,得到蛋白‑脂质体复合物。其中顺磁脂质体含有一定比例的络合镧系金属离子的顺磁磷脂分子,而非顺磁脂质体不含有顺磁磷脂分子。通过采集蛋白‑脂质体复合物的固体核磁共振谱图,对比在顺磁和非顺磁脂质体中的一维15N固体核磁共振图谱,进而利用信号强度的对比获取膜融合蛋白在脂质体中的定位,即区分膜融合蛋白在脂质体内部或在其表面。采用本发明提供的核磁共振方法能够检测膜融合蛋白在脂质体中的定位。

    一种基于固体核磁共振技术检测RNA结构的方法

    公开(公告)号:CN110441344B

    公开(公告)日:2020-09-29

    申请号:CN201910554062.X

    申请日:2019-06-25

    Applicant: 北京大学

    Inventor: 王申林 赵莎

    Abstract: 本发明公开了一种基于固体核磁共振技术检测RNA结构的方法。通过设定一种新型二维固体核磁脉冲序列hCHNH,记录核糖核苷酸碱基中13C原子核与氨基和亚氨基上1H原子核的化学位移相关,获取长程相关信息。与常用的hCNH序列不同,hCHNH利用两个高效率的包含氢原子核的CP传递方法代替效率较低的13C‑15N CP传递,实现了在高转速固体核磁的条件下,灵敏度提高60%以上。基于hCHNH脉冲序列的RNA结构固体核磁共振技术检测,还可以实现RNA中碱基配对类型的区分,拓展了固体核磁共振技术在解析RNA结构方面的应用。

    一种检测RNA中弱稳定性碱基对的固体核磁共振方法

    公开(公告)号:CN112461881A

    公开(公告)日:2021-03-09

    申请号:CN202011108878.9

    申请日:2020-10-16

    Abstract: 本发明公开了一种检测RNA中弱稳定性碱基对的固体核磁共振方法,涉及固体核磁共振波谱学领域。通过设计一种新型二维氢检测固体核磁共振脉冲序列2D WaterREXSY,检测RNA中稳定性较弱的碱基对。在脉冲序列中,利用了氢核上的Lee‑Goldburg自旋锁场,观测水与RNA中可交换质子的化学交换,并通过压制1H自旋扩散和偶极耦合相互作用,实现化学交换过程的专一性检测。弱稳定性碱基对中的可交换质子与水的交换速率较快,信号较强,从而实现对弱稳定性碱基对的特异性检测。

    一种原子分子水平的原位细胞分析方法

    公开(公告)号:CN110632113A

    公开(公告)日:2019-12-31

    申请号:CN201910600331.1

    申请日:2019-07-04

    Applicant: 北京大学

    Abstract: 本发明属于原位细胞分析技术领域,本发明提供了一种原子分子水平的原位细胞分析方法,包括:设计LHSQC脉冲序列;固体核磁检测细菌与抗菌肽反应产物。通过本发明的方法,使检测灵敏度提高三倍以上,可以在较短的时间内获取高质量的固体核磁共振谱图,避免了长时间实验所导致的细菌死亡和代谢物改变,保持了细菌的活性并获取一系列可以反映细菌表面结构信息的一维、二维核磁谱图。

    一种可获取高质量固体核磁共振谱图的RNA固体样品制备方法及其结构检测方法

    公开(公告)号:CN110609056A

    公开(公告)日:2019-12-24

    申请号:CN201910554400.X

    申请日:2019-06-25

    Applicant: 北京大学

    Abstract: 本发明涉及基于核磁共振技术生物大分子结构检测技术领域,尤其涉及一种可获取高质量固体核磁共振谱图的RNA固体样品制备方法及其结构检测方法:将至少一种碱基由15N和13C进行标记的RNA样品在氘代缓冲液中升温退火,使其正确折叠;在上述RNA溶液中依次加入一价或者二价阳离子水溶液和2-3倍体积预冷的氘代无水乙醇;将上述体系于低温静置过夜,离心弃去上清,用少量预冷氘代乙醇清洗底部沉淀;使用固体核磁共振波谱仪对沉淀样品进行检测;收集并分析检测图谱。本发明简单、快速、具有普适性,无需结晶及其他繁琐的操作步骤,即可以获得高分辨率的固体核磁谱图。

    一种基于固体核磁共振技术检测RNA结构的方法

    公开(公告)号:CN110441344A

    公开(公告)日:2019-11-12

    申请号:CN201910554062.X

    申请日:2019-06-25

    Applicant: 北京大学

    Inventor: 王申林 赵莎

    Abstract: 本发明公开了一种基于固体核磁共振技术检测RNA结构的方法。通过设定一种新型二维固体核磁脉冲序列hCHNH,记录核糖核苷酸碱基中13C原子核与氨基和亚氨基上1H原子核的化学位移相关,获取长程相关信息。与常用的hCNH序列不同,hCHNH利用两个高效率的包含氢原子核的CP传递方法代替效率较低的13C-15N CP传递,实现了在高转速固体核磁的条件下,灵敏度提高60%以上。基于hCHNH脉冲序列的RNA结构固体核磁共振技术检测,还可以实现RNA中碱基配对类型的区分,拓展了固体核磁共振技术在解析RNA结构方面的应用。

    一种检测RNA中弱稳定性碱基对的固体核磁共振方法

    公开(公告)号:CN112461881B

    公开(公告)日:2022-02-18

    申请号:CN202011108878.9

    申请日:2020-10-16

    Abstract: 本发明公开了一种检测RNA中弱稳定性碱基对的固体核磁共振方法,涉及固体核磁共振波谱学领域。通过设计一种新型二维氢检测固体核磁共振脉冲序列2D WaterREXSY,检测RNA中稳定性较弱的碱基对。在脉冲序列中,利用了氢核上的Lee‑Goldburg自旋锁场,观测水与RNA中可交换质子的化学交换,并通过压制1H自旋扩散和偶极耦合相互作用,实现化学交换过程的专一性检测。弱稳定性碱基对中的可交换质子与水的交换速率较快,信号较强,从而实现对弱稳定性碱基对的特异性检测。

    一种可获取高质量固体核磁共振谱图的RNA固体样品制备方法及其结构检测方法

    公开(公告)号:CN110609056B

    公开(公告)日:2020-09-29

    申请号:CN201910554400.X

    申请日:2019-06-25

    Applicant: 北京大学

    Abstract: 本发明涉及基于核磁共振技术生物大分子结构检测技术领域,尤其涉及一种可获取高质量固体核磁共振谱图的RNA固体样品制备方法及其结构检测方法:将至少一种碱基由15N和13C进行标记的RNA样品在氘代缓冲液中升温退火,使其正确折叠;在上述RNA溶液中依次加入一价或者二价阳离子水溶液和2‑3倍体积预冷的氘代无水乙醇;将上述体系于低温静置过夜,离心弃去上清,用少量预冷氘代乙醇清洗底部沉淀;使用固体核磁共振波谱仪对沉淀样品进行检测;收集并分析检测图谱。本发明简单、快速、具有普适性,无需结晶及其他繁琐的操作步骤,即可以获得高分辨率的固体核磁谱图。

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