公开(公告)号：CN1220774C

公开(公告)日：2005-09-28

申请号：CN03101874.2

申请日：2003-01-28

Applicant: 北京大学

Inventor： 安成才 ,  严远鑫 ,  栗力 ,  古佳玉 ,  谭桂宏 ,  陈章良

IPC: C12N15/10 ,  C12N15/09 ,  C12P19/34 ,  C12Q1/68 ,  C12R1

Abstract: 本发明提供了一种PCR方法，它包括以下步骤：1)利用末端转移酶将基因组DNA加Poly d(T)n尾；2)将DNA片段用产生3’-突出端的限制性内切酶进行酶切，产生3’突出末端DNA片段；3)利用DNA聚合酶，以产生3’突出末端的DNA片段为模板与已知序列区的特异引物进行单向PCR反应；4)单向PCR反应特异靶目标DNA的3’-末端多附加一个A碱基、然后与带有3’-T尾的T-linker连接；5)以已知区特异引物和T-linker内的引物扩增目标DNA分子。本发明PCR方法具有简单快速、特异性高、通用性强、重复性好、一次扩增片段较长且成本低廉等优点。可广泛适用于分子生物学研究中多种目的的染色体步查，如转基因动、植物及微生物中外源基因插入位点的鉴定、基因未知区段新基因的分离等。

公开(公告)号：CN1521263A

公开(公告)日：2004-08-18

申请号：CN03101874.2

申请日：2003-01-28

Applicant: 北京大学

Inventor： 安成才 ,  严远鑫 ,  栗力 ,  古佳玉 ,  谭桂宏 ,  陈章良

IPC: C12P19/34 ,  C12Q1/68

Abstract: 本发明提供了一种PCR方法。目的是提供一种高特异性、高成功率的PCR方法。本发明的技术方案是将基因组DNA加Poly d(T)n尾、产生3’突出末端、进行单向PCR反应与T－linker特异性连接、进行扩增反应。称为T－linker PCR。本发明T－linker PCR与现有PCR方法相比，具有简单快速、特异性高、通用性强、重复性好、一次扩增片段较长且成本低廉等优点。T－linker PCR广泛适用于分子生物学研究中多种目的的染色体步查，如转基因动、植物及微生物中外源基因插入位点的鉴定、基因未知区段新基因的分离等。