公开(公告)号：CN1162704C

公开(公告)日：2004-08-18

申请号：CN02121363.1

申请日：2002-06-17

Applicant: 北京大学

Inventor： 顾军 ,  肖能明

IPC: G01N33/531 ,  G01N33/68

Abstract: 本发明提供了一种检测人血液中Klotho(KL)蛋白的方法，是利用KL蛋白抗体来检测人血液中的KL蛋白。KL蛋白抗体的制备方法为：利用RT-PCR技术，从人肾脏组织的RNA中扩增出KL基因的部分cDNA序列，将该片段cDNA克隆到pET质粒，构建成KL蛋白片段的表达载体；将表达载体转化E.coli细菌株BL21/DE3，通过IPTG的诱导，使转化菌表达外源蛋白；将培养诱导的细胞收集，破碎，用Ni-NTA结合分离的方法，获得纯化的KL蛋白片段；用获得的纯化的KL重组蛋白片段注射兔子，从兔子身上收集血清，经饱和硫酸铵纯化得到抗KL蛋白抗体。然后利用KL蛋白抗体采用Western方法或者ELISA方法检测人血液中的KL蛋白。本发明利用特异地KL蛋白片段制备的抗体，可以特异地识别KL蛋白。利用制备的抗体可以在人的血液中检测到KL蛋白，用于临床和研究中。

公开(公告)号：CN1384359A

公开(公告)日：2002-12-11

申请号：CN02121363.1

申请日：2002-06-17

Applicant: 北京大学

Inventor： 顾军 ,  肖能明

IPC: G01N33/53 ,  G01N33/531 ,  G01N33/68

Abstract: 本发明提供了一种检测人血液中Klotho(KL)蛋白的方法,是利用KL蛋白抗体来检测人血液中的KL蛋白。KL蛋白抗体的制备方法为:利用RT－PCR技术,从人肾脏组织的RNA中扩增出KL基因的部分cDNA序列,将该片段cDNA克隆到pET质粒,构建成KL蛋白片段的表达载体;将表达载体转化E.coli细菌株BL21/DE3,通过IPTG的诱导,使转化菌表达外源蛋白;将培养诱导的细胞收集,破碎,用Ni－NTA结合分离的方法,获得纯化的KL蛋白片段;用获得的纯化的KL重组蛋白片段注射兔子,从兔子身上收集血清,经饱和硫酸铵纯化得到抗KL蛋白抗体。然后利用KL蛋白抗体采用Westem方法或者ELISA方法检测人血液中的KL蛋白。本发明利用特异地KL蛋白片段制备的抗体,可以特异地识别KL蛋白。利用制备的抗体可以在人的血液中检测到KL蛋白,用于临床和研究中。