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公开(公告)号：CN108220317A
公开(公告)日：2018-06-29
申请号：CN201711307979.7
申请日：2017-12-11
Applicant: 北京大学
Abstract: 本发明属于微生物学、基因工程和蛋白质工程领域，具体提供了一种重组表达质粒及其制备方法、用途，重组表达质粒包含：溶菌酶基因和核酸酶基因；核酸酶基因包括核酸酶基因序列和编码膜间质定位信号肽的基因序列；重组表达质粒可以稳定表达溶菌酶并积累在细胞质内，稳定表达的核酸酶积累在膜间质的空间中，两者的表达积累并不干扰菌体正常生长和目的蛋白的表达积累。当释放目的蛋白时，改变宿主细胞的通透性，溶菌酶进入膜间质空间中降解肽聚糖层，核酸酶进入细胞质中降解基因组核酸和质粒，使宿主细胞稳定可控发生自溶释放细胞内目的蛋白，同时降解所释放的核酸，时间短，释放目的蛋白的效率高，且无需使用昂贵的仪器或添加额外的溶菌酶，成本低。
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公开(公告)号：CN106191088B
公开(公告)日：2019-06-28
申请号：CN201610609685.9
申请日：2016-07-28
Applicant: 北京大学
Abstract: 本发明涉及生物技术和合成生物学领域，具体公开了一套将质粒上的表达系统经过优化无痕插入染色体从而得到完全替代原质粒功能的重组大肠杆菌构建方法，本发明寻找到一个普遍存在的大肠杆菌染色体位置(insH11基因)，用外源基因替换insH11基因序列，改造后的菌体在广泛使用的培养条件下生长和代谢无障碍。本发明还提供了一套无痕在此位置插入外源基因的重组大肠杆菌的构建方法、相关重组菌株和基因重组质粒。
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公开(公告)号：CN106191088A
公开(公告)日：2016-12-07
申请号：CN201610609685.9
申请日：2016-07-28
Applicant: 北京大学
CPC classification number: C12N15/70
Abstract: 本发明涉及生物技术和合成生物学领域，具体公开了一套将质粒上的表达系统经过优化无痕插入染色体从而得到完全替代原质粒功能的重组大肠杆菌构建方法，本发明寻找到一个普遍存在的大肠杆菌染色体位置(insH11基因)，用外源基因替换insH11基因序列，改造后的菌体在广泛使用的培养条件下生长和代谢无障碍。本发明还提供了一套无痕在此位置插入外源基因的重组大肠杆菌的构建方法、相关重组菌株和基因重组质粒。
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公开(公告)号：CN108220317B
公开(公告)日：2021-04-16
申请号：CN201711307979.7
申请日：2017-12-11
Applicant: 北京大学
Abstract: 本发明属于微生物学、基因工程和蛋白质工程领域，具体提供了一种重组表达质粒及其制备方法、用途，重组表达质粒包含：溶菌酶基因和核酸酶基因；核酸酶基因包括核酸酶基因序列和编码膜间质定位信号肽的基因序列；重组表达质粒可以稳定表达溶菌酶并积累在细胞质内，稳定表达的核酸酶积累在膜间质的空间中，两者的表达积累并不干扰菌体正常生长和目的蛋白的表达积累。当释放目的蛋白时，改变宿主细胞的通透性，溶菌酶进入膜间质空间中降解肽聚糖层，核酸酶进入细胞质中降解基因组核酸和质粒，使宿主细胞稳定可控发生自溶释放细胞内目的蛋白，同时降解所释放的核酸，时间短，释放目的蛋白的效率高，且无需使用昂贵的仪器或添加额外的溶菌酶，成本低。
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公开(公告)号：CN109030607A
公开(公告)日：2018-12-18
申请号：CN201810718668.8
申请日：2018-07-03
Applicant: 北京大学
IPC: G01N27/447
CPC classification number: G01N27/447
Abstract: 本发明提供了一种多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶、电泳系统及电泳方法，包括：凝胶缓冲液和分离凝胶；凝胶缓冲液包括电泳阳离子和电泳阴离子；电泳阳离子的浓度为25mM‑200mM；电泳阴离子的浓度为25mM‑200mM。通过使用上述的聚丙烯酰胺凝胶以及连续电泳系统，可以同时检测的蛋白样品数多达几百个，上样量可低至0.4μl，蛋白样品分子量在12kDa‑130kDa范围内均可以进行有效性分离，获得可以接受的较高的条带分辨率和各个水平排电泳迁移的一致性，上述的聚丙烯酰胺凝胶及其连续电泳系统可与现有常规的水平电泳设备兼容，凝胶染色或者免疫印迹检测方法与常规方法一致，具有广泛的应用性。
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