公开(公告)号：CN118638827A

公开(公告)日：2024-09-13

申请号：CN202410578793.9

申请日：2024-05-10

Applicant: 北京化工大学

Inventor： 聂开立 ,  杨蕊伊 ,  金淑铭 ,  王芳 ,  邓利

IPC: C12N15/70 ,  C12N9/00 ,  C12N15/52 ,  C12Q1/6806 ,  C12Q1/25 ,  G01N21/64 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了基于逆转录因子FadR构建脂肪酸辅酶A连接酶高通量筛选系统，属于合成生物学与蛋白质工程技术领域，通过FadR对胞内脂肪酸及脂肪酸酰基辅酶A的拮抗作用动态响应辅酶A连接酶的催化效率，经过调节FadR蛋白的表达水平优化筛选系统，应用于FadD的高通量筛选。主要步骤包括：筛选质粒的构建，宿主的优化；转录水平优化等手段，构建该高通量筛选系统的工作曲线应用于不同来源的FadD进行筛选，构建脂肪酸酯合成途径经发酵验证筛选系统准确性；对筛选出的最强FadD进一步进化，并应用所构荧光筛选系统进行高通量筛选；对优势突变体进行脂肪酸酯发酵产量检测，获得生物柴油产量的进一步提高。