公开(公告)号：CN111118031A

公开(公告)日：2020-05-08

申请号：CN202010097920.5

申请日：2020-02-17

Applicant: 云南省烟草农业科学研究院

Inventor： 李文正 ,  隋学艺 ,  胡梦阳 ,  王丙武 ,  宋中邦 ,  高玉龙 ,  李梅云 ,  赵璐 ,  袁诚 ,  张洪博 ,  师君丽 ,  李永平 ,  孔光辉 ,  曾建敏 ,  邹聪明 ,  刘勇 ,  黄昌军 ,  吴兴富

IPC: C12N15/29 ,  C12N15/10 ,  C12N15/82 ,  C07K14/415 ,  A01H4/00 ,  A01H5/00 ,  A01H6/82

Abstract: 本发明公开了烟草生物碱合成负向调控基因NtARF6及其克隆方法与应用，烟碱合成负向调控基因NtARF6核苷酸序列如SEQ ID：NO:1所示，编码的氨基酸序列如SEQ ID：NO:2所示。本发明还公开了烟碱合成负向调控基因NtARF6的克隆方法，具体步骤包括：A、确定NtARF6基因序列；B、提取烟草RNA，反转录得到第一链cDNA；C、根据NtARF6基因序列设计合成特异性引物，以cDNA作为模板，进行PCR扩增；D、回收和纯化PCR产物；E、构建了含NtARF6基因的过表达载体。将过表达载体通过农杆菌介导的转化在烟草中过表达，制备转基因植株。获得的转基因植株尼古丁含量平均下降36.2％；降烟碱含量平均下降50.5％；假木贼碱含量平均下降44.9％；新烟碱含量平均下降60.2％。说明烟草NtARF6基因在培育低烟草生物碱含量的烟草品种方面具有较大的应用前景。

公开(公告)号：CN109337918A

公开(公告)日：2019-02-15

申请号：CN201811348441.5

申请日：2018-11-13

Applicant: 云南省烟草农业科学研究院

Inventor： 高玉龙 ,  宋中邦 ,  李梅云 ,  王丙武 ,  焦芳婵 ,  吴兴富 ,  李文正 ,  隋学艺 ,  李永平

IPC: C12N15/54 ,  C12N9/12 ,  C12N15/10 ,  C12N15/82 ,  A01H5/00 ,  A01H6/82

Abstract: 本发明公开了一种烟草蛋白激酶基因NtCIPK1及其克隆方法与应用；所述的烟草蛋白激酶基因NtCIPK1核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；克隆方法包括烟草叶片cDNA合成：提取烟草叶片总RNA，反转录得到第一链cDNA；NtCIPK1基因的PCR扩增：以烟草叶片cDNA为模板，根据NtCIPK1基因序列设计引物，进行PCR扩增，回收和纯化PCR扩增产物，并测序。应用为所述的烟草蛋白激酶基因NtCIPK1在获得调控烟草钾含量的转基因烟草植株中的应用。本发明利用CRISPR/CAS9技术对克隆的NtCIPK1基因进行了功能鉴定。烟草NtCIPK1基因的克隆鉴定为调控烟草钾含量提供了新的基因靶标。

公开(公告)号：CN108300791A

公开(公告)日：2018-07-20

申请号：CN201810129683.9

申请日：2018-02-08

Applicant: 云南省烟草农业科学研究院

Inventor： 李梅云 ,  吴文涛 ,  宋中邦 ,  张靖 ,  曾建敏 ,  王扬 ,  王丙武 ,  焦芳婵 ,  高玉龙 ,  吴兴富 ,  李永平 ,  李文正

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/686

Abstract: 本发明公开了一种烟草根结线虫病中三种主要病原线虫的同步检测鉴定方法。包括PCR引物设计、DNA模板制备、PCR扩增、产物检测步骤。本发明根据南方根结线虫、花生根结线虫和爪哇根结线虫的种类特异区序列设计了包含6条PCR引物用于上述3种根结线虫的种类鉴定，鉴定的稳定性好、准确性高；所设计的6条引物组合使用，可以实现1次PCR反应完成3种烟草根结线虫病病原线虫的同步检测，鉴定方便、省时；采用普通PCR仪和常规试剂，检测成本，利于推广应用；本发明包含设计了针对病根样品和土壤样品的DNA制备方法，可以以包括卵、幼虫和成虫在内的各发育阶段的根结线虫为对象进行种类鉴定，具有广泛的使用范围。

公开(公告)号：CN106498068A

公开(公告)日：2017-03-15

申请号：CN201610994749.1

申请日：2016-11-11

Applicant: 云南省烟草农业科学研究院

Inventor： 童治军 ,  焦芳婵 ,  肖炳光 ,  陈学军 ,  李梅云 ,  吴兴富 ,  李永平

IPC: C12Q1/68 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种与烟草TMV抗性基因N紧密连锁的共显性SSR标记及其应用，所述的与烟草TMV抗性基因N紧密连锁的共显性SSR标记的编号为TM508-007和TM508-118，其扩增产物核苷酸序列分别为SEQ ID No.1和SEQ ID No.2、SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示。所述的应用为所述的与烟草TMV抗性基因N紧密连锁的共显性SSR标记在检测烟草基因组DNA中是否存在烟草抗TMV病基因N中的应用。本发明所述的共显性SSR标记具有稳定、可靠、简便、快捷和低成本的特点，因此该分子标记可以作为烟草TMV病抗病育种中N基因分子标记辅助选择的应用。

公开(公告)号：CN103004705B

公开(公告)日：2014-01-15

申请号：CN201310003615.5

申请日：2013-01-06

Applicant: 云南省烟草农业科学研究院

Inventor： 刘勇 ,  吴兴富 ,  朱艰 ,  李梅云 ,  许美玲 ,  卢秀萍 ,  李永平 ,  杨华兵

IPC: A01K67/033 ,  A01H1/02

Abstract: 本发明公开了一种规模化繁殖无毒烟蚜的方法，采用高抗烟草花叶病毒（TMV）和马铃薯Y病毒（PVY）烟草材料作为蚜虫的繁殖寄主；通过育苗或盆栽或移栽后，在网室或温室内人工繁殖蚜虫，选择双抗且蚜虫繁殖效率高的株系，用于繁殖无毒蚜虫，本发明通过采用高抗烟草花叶病毒和马铃薯Y病毒的烟草材料繁殖蚜虫，在不增加现有蚜茧蜂繁殖工序和成本的情况下，能有效降低蚜虫携带病毒病的潜在风险；本发明具有简便易行、经济可靠等特点；可促进蚜茧蜂防治作物蚜虫的应用推广。

公开(公告)号：CN103404383A

公开(公告)日：2013-11-27

申请号：CN201310372717.4

申请日：2013-08-23

Applicant: 云南省烟草农业科学研究院

Inventor： 李梅云 ,  刘勇 ,  肖炳光 ,  李永平 ,  焦芳婵 ,  陈学军

IPC: A01G7/00 ,  A01G31/00

Abstract: 本发明公开了一种烟草TMV抗性的苗期抗性鉴定方法，包括保温水池建造、池水加热与循环、TMV接种烟苗、病情调查与分级等步骤。本发明具有发病迅速、重复性好、结果可靠、无其他病害干扰等特点。实现了用苗期鉴定结果代替传统大田鉴定结果。实现了在较小面积上鉴定大量材料、一年多次鉴定。提高了结果的可靠性、缩短了鉴定周期、节省鉴定成本。

公开(公告)号：CN112143738B

公开(公告)日：2023-04-11

申请号：CN202011054281.0

申请日：2020-09-30

Applicant: 云南省烟草农业科学研究院

Inventor： 王丙武 ,  隋学艺 ,  高玉龙 ,  宋中邦 ,  赵璐 ,  李梅云 ,  孔光辉 ,  焦芳婵 ,  吴兴富 ,  李永平

IPC: C12N15/29 ,  C12N15/10 ,  C12N15/82 ,  A01H5/12 ,  A01H6/82

Abstract: 本发明公开了一种烟草受体蛋白基因及其克隆方法与应用。所述的烟草受体蛋白基因包括NtCOI1‑1和NtCOI1‑2，其核苷酸序列如SEQ ID:NO.1和SEQ ID:NO.2所示。克隆方法包括烟草根cDNA合成：提取烟草根总RNA，反转录得到第一链cDNA；NtCOI1‑1、2基因的PCR扩增：以烟草根cDNA为模板，根据NtCOI1‑1、2基因序列设计引物，进行PCR扩增，回收和纯化PCR扩增产物，并测序。应用为所述的烟草受体蛋白基因NtCOI1‑1、2在调控烟草烟碱含量的转基因烟草植株中的应用。本发明利用CRISPR/CAS9技术对克隆的NtCOI1‑1、2基因进行了功能鉴定。烟草NtCOI1‑1、2基因的克隆鉴定为调控烟草烟碱含量提供了新的靶标基因。

公开(公告)号：CN109468329B

公开(公告)日：2022-04-08

申请号：CN201811347121.8

申请日：2018-11-13

Applicant: 云南省烟草农业科学研究院

Inventor： 高玉龙 ,  王丙武 ,  宋中邦 ,  李梅云 ,  李文正 ,  焦芳婵 ,  吴兴富 ,  隋学艺 ,  赵璐 ,  李永平 ,  邹聪明

IPC: C12N15/29 ,  C07K14/415 ,  C12N15/10 ,  C12N15/82 ,  A01H5/00 ,  A01H6/82

Abstract: 本发明公开了一种烟草外向整流钾离子通道基因NtSKOR1及其克隆方法与应用；所述的烟草外向整流钾离子通道基因NtSKOR1氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；克隆方法包括烟草叶片cDNA合成：提取烟草叶片总RNA，反转录得到第一链cDNA；NtSKOR1基因的PCR扩增：以烟草叶片cDNA为模板，根据NtSKOR1基因序列设计引物，进行PCR扩增，回收和纯化PCR扩增产物，并测序。应用为所述的烟草外向整流钾离子通道基因NtSKOR1在调控烟草钾离子含量的转基因烟草植株中的应用。本发明利用CRISPR/CAS9技术对克隆的NtSKOR1基因进行了功能鉴定。烟草NtSKOR1基因的克隆鉴定为调控烟草钾含量提供了新的基因靶标。

公开(公告)号：CN108424921B

公开(公告)日：2021-04-20

申请号：CN201810360473.0

申请日：2018-04-20

Applicant: 云南省烟草农业科学研究院

Inventor： 李文正 ,  宋中邦 ,  李梅云 ,  王丙武 ,  高玉龙 ,  吴兴富 ,  隋学艺 ,  赵璐 ,  李永平

IPC: C12N15/53 ,  C12N9/02 ,  A01H5/00 ,  A01H6/82

Abstract: 本发明公开了一种尼古丁转化率的CYP82E10基因错义突变体M594及其应用。所述的降低尼古丁转化率的CYP82E10基因错义突变体M594相对于核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示的CYP82E10基因，所述的降低尼古丁转化率的CYP82E10基因错义突变体M594含有的CYP82E10基因序列中342位的C被T取代发生了点突变，所述的降低尼古丁转化率的CYP82E10基因错义突变体M594的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。应用为所述的降低尼古丁转化率的CYP82E10基因错义突变体M594在获得尼古丁低转化率的烟草植株中的应用。本发明所述的降低尼古丁转化率的CYP82E10基因错义突变体M594获得的云烟87材料中，叶片尼古丁转化率分别比对照下降约55%，显著降低了尼古丁的转化率。

公开(公告)号：CN107365775B

公开(公告)日：2020-02-07

申请号：CN201710708196.3

申请日：2017-08-17

Applicant: 云南省烟草农业科学研究院

Inventor： 王丙武 ,  高玉龙 ,  李文正 ,  宋中邦 ,  李梅云 ,  李永平 ,  王燃 ,  罗朝鹏 ,  曾建敏 ,  刘勇 ,  黄昌军 ,  吴兴富 ,  徐向丽 ,  张晨东

IPC: C12N15/29 ,  C07K14/415 ,  C12N15/82 ,  A01H5/00 ,  A01H6/82

Abstract: 本发明公开了一种烟草腋芽生长调控基因NtMAX3‑2及其克隆方法与应用，烟草腋芽生长调控基因NtMAX3‑2核苷酸序列如SEQ ID：No.1所示，编码的氨基酸序列如SEQ ID：No.2所示。本发明还公开了烟草腋芽生长调控基因NtMAX3‑2的克隆方法，具体步骤包括：A、确定NtMAX3‑2基因序列；B、提取烟草RNA，反转录得到第一链cDNA；C、根据NtMAX3‑2基因序列设计合成特异性引物，以cDNA作为模板，进行PCR扩增；D、回收和纯化PCR产物；E、纯化产物与载体连接，转化感受态细胞；F、筛选阳性克隆，对阳性克隆PCR扩增、测序。通过调控烟草腋芽生长调控基因NtMAX3‑2的表达，可抑制打顶后烟草腋芽的形成，从而有望降低烟用抑芽剂使用，为生产绿色优质烟叶和降低人工成本提供基因资源。