公开(公告)号：CN102517326B

公开(公告)日：2013-03-27

申请号：CN201210010544.7

申请日：2012-01-14

Applicant: 云南省农业科学院粮食作物研究所 ,  云南田瑞种业有限公司

Inventor： 陈威 ,  番兴明 ,  刘丽 ,  王琨

IPC: C12N15/82 ,  A01H5/00 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明公开了一种用玉米醇溶蛋白基因RNAi载体提高玉米赖氨酸含量的方法。属植物基因工程技术领域。该方法是用基因枪法将玉米醇溶蛋白基因RNAi载体导入受体玉米品种，该载体含有胚乳特异表达启动子P-zp22/6，正、反向目的基因22-KD醇溶蛋白基因部分cDNA片段22-KD-P，GUS基因内含子和终止子poly(A)。还提供了另一个玉米醇溶蛋白基因RNAi载体pUC19-RNAi-19KD，该载体含有正、反向目的基因19-KD醇溶蛋白基因部分cDNA片段19-KD-P。将两个RNAi载体分别导入玉米品种，成功获得高赖氨酸含量的玉米转基因植株，赖氨酸含量提高15-60%，转育周期只需1-2年。

公开(公告)号：CN102533847B

公开(公告)日：2014-07-09

申请号：CN201210010542.8

申请日：2012-01-14

Applicant: 云南省农业科学院粮食作物研究所 ,  云南田瑞种业有限公司

Inventor： 陈威 ,  番兴明 ,  刘丽 ,  王琨

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明公开了一种玉米醇溶蛋白基因RNAi载体的构建方法。该方法以pUC19为骨架载体，构建插入正向目的片段和胚乳特异性表达启动子P-zp22/6的重组载体，构建插入反向目的片段和终止子poly(A)的重组载体，将两重组载体分别酶切、连接得到重组载体pUC19-p22/6-22KD1-22KD2-poly(A)；再将GUS基因内含子插入到该重组载体，得到玉米醇溶蛋白基因RNAi载体，目的片段是22-KD醇溶蛋白基因部分cDNA片段。用相同方法构建了另一个玉米醇溶蛋白基因RNAi载体，目的片段为19-KD醇溶蛋白基因部分cDNA片段。该方法缩短了载体构建的时间，能成功获得高赖氨酸含量的转基因植株。

公开(公告)号：CN102533847A

公开(公告)日：2012-07-04

申请号：CN201210010542.8

申请日：2012-01-14

Applicant: 云南省农业科学院粮食作物研究所 ,  云南田瑞种业有限公司

Inventor： 陈威 ,  番兴明 ,  刘丽 ,  王琨

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明公开了一种玉米醇溶蛋白基因RNAi载体的构建方法。该方法以pUC19为骨架载体，构建插入正向目的片段和胚乳特异性表达启动子P-zp22/6的重组载体，构建插入反向目的片段和终止子poly(A)的重组载体，将两重组载体分别酶切、连接得到重组载体pUC19-p22/6-22KD1-22KD2-poly(A)；再将GUS基因内含子插入到该重组载体，得到玉米醇溶蛋白基因RNAi载体，目的片段是22-KD醇溶蛋白基因部分cDNA片段。用相同方法构建了另一个玉米醇溶蛋白基因RNAi载体，目的片段为19-KD醇溶蛋白基因部分cDNA片段。该方法缩短了载体构建的时间，能成功获得高赖氨酸含量的转基因植株。

公开(公告)号：CN102517326A

公开(公告)日：2012-06-27

申请号：CN201210010544.7

申请日：2012-01-14

Applicant: 云南省农业科学院粮食作物研究所 ,  云南田瑞种业有限公司

Inventor： 陈威 ,  番兴明 ,  刘丽 ,  王琨

IPC: C12N15/82 ,  A01H5/00 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明公开了一种用玉米醇溶蛋白基因RNAi载体提高玉米赖氨酸含量的方法。属植物基因工程技术领域。该方法是用基因枪法将玉米醇溶蛋白基因RNAi载体导入受体玉米品种，该载体含有胚乳特异表达启动子P-zp22/6，正、反向目的基因22-KD醇溶蛋白基因部分cDNA片段22-KD-P，GUS基因内含子和终止子poly(A)。还提供了另一个玉米醇溶蛋白基因RNAi载体pUC19-RNAi-19KD，该载体含有正、反向目的基因19-KD醇溶蛋白基因部分cDNA片段19-KD-P。将两个RNAi载体分别导入玉米品种，成功获得高赖氨酸含量的玉米转基因植株，赖氨酸含量提高15-60%，转育周期只需1-2年。

公开(公告)号：CN102517314A

公开(公告)日：2012-06-27

申请号：CN201210010543.2

申请日：2012-01-14

Applicant: 云南省农业科学院粮食作物研究所 ,  云南田瑞种业有限公司

Inventor： 陈威 ,  番兴明 ,  刘丽 ,  王琨

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明公开了一种玉米醇溶蛋白基因RNAi载体。所提供的玉米醇溶蛋白基因RNAi载体pUC19-RNAi-22KD含有胚乳特异表达启动子P-zp22/6，正、反向目的基因22-KD醇溶蛋白基因部分cDNA片段22-KD-P，GUS基因内含子和终止子poly(A)。还提供了另一个玉米醇溶蛋白基因RNAi载体pUC19-RNAi-19KD，该载体含有胚乳特异表达启动子P-zp22/6，正、反向目的基因19-KD醇溶蛋白基因部分cDNA片段19-KD-P，GUS基因内含子和终止子poly(A)。该载体导入玉米品种能成功获得高赖氨酸含量的玉米转基因植株，赖氨酸含量提高15-60%，转育周期只需1-2年。

公开(公告)号：CN102517314B

公开(公告)日：2013-04-10

申请号：CN201210010543.2

申请日：2012-01-14

Applicant: 云南省农业科学院粮食作物研究所 ,  云南田瑞种业有限公司

Inventor： 陈威 ,  番兴明 ,  刘丽 ,  王琨

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明公开了一种玉米醇溶蛋白基因RNAi载体。所提供的玉米醇溶蛋白基因RNAi载体pUC19-RNAi-22KD含有胚乳特异表达启动子P-zp22/6，正、反向目的基因22-KD醇溶蛋白基因部分cDNA片段22-KD-P，GUS基因内含子和终止子poly(A)。还提供了另一个玉米醇溶蛋白基因RNAi载体pUC19-RNAi-19KD，该载体含有胚乳特异表达启动子P-zp22/6，正、反向目的基因19-KD醇溶蛋白基因部分cDNA片段19-KD-P，GUS基因内含子和终止子poly(A)。该载体导入玉米品种能成功获得高赖氨酸含量的玉米转基因植株，赖氨酸含量提高15-60%，转育周期只需1-2年。