公开(公告)号：CN101792820B

公开(公告)日：2012-06-27

申请号：CN201010125250.X

申请日：2010-03-16

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 刘雅婷 ,  郑元仙 ,  徐小刚 ,  李永忠 ,  孙文涛 ,  仵发静 ,  陈雪娇

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明是一种快速检测和鉴定凤仙花坏死斑病毒的分子生物学方法及其引物，属植物病毒分子生物学检测鉴定领域。本发明提供3对引物，其中引物L6如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示；引物M6如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示；引物S3如SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示。用其中任一对引物进行RT-PCR扩增，序列比对相似性大于90％，样品即为INSV。用上述3对引物进行RT-PCR扩增，当分别扩增出744bp、637bp和542bp左右的片段时，不需再进行克隆、测序和序列比对，即可确认样品为INSV，可以避免该检测中假阳性结果，简化了检测过程。

公开(公告)号：CN101812540B

公开(公告)日：2012-12-12

申请号：CN201010124068.2

申请日：2010-03-15

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 刘雅婷 ,  徐小刚 ,  李永忠 ,  孙文涛 ,  仵发静 ,  陈雪娇

IPC: C12Q1/68

Abstract: 本发明是一种检测凤仙花坏死斑病毒的实时荧光定量RT-PCR方法及其引物、探针和试剂盒，属植物病毒分子生物学检测鉴定技术领域。本发明的上游引物的序列如SEQ ID NO：1所示，下游引物的序列如SEQ ID NO：2所示，目标产物片段长度为182bp，TaqMan探针的序列如SEQ ID NO：3所示。本发明试剂盒和检测方法包括了上述引物和探针。应用本发明，可靠性和重复性好，样品三个重复所得的Ct值差值在0.01至1.7；稳定性良好，在不同寄主上检测的Ct平均值差值在0.25至0.34；能检测出INSV病毒含量6.99拷贝·μl-1，具有微量检测的效果；检测的特异性强，只有INSV有荧光信号。

公开(公告)号：CN101812540A

公开(公告)日：2010-08-25

申请号：CN201010124068.2

申请日：2010-03-15

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 刘雅婷 ,  徐小刚 ,  李永忠 ,  孙文涛 ,  仵发静 ,  陈雪娇

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12N15/11 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明是一种检测凤仙花坏死斑病毒的实时荧光定量RT-PCR方法及其引物、探针和试剂盒，属植物病毒分子生物学检测鉴定技术领域。本发明的上游引物的序列如SEQ ID NO：1所示，下游引物的序列如SEQ ID NO：2所示，目标产物片段长度为182bp，TaqMan探针的序列如SEQ ID NO：3所示。本发明试剂盒和检测方法包括了上述引物和探针。应用本发明，可靠性和重复性好，样品三个重复所得的Ct值差值在0.01至1.7；稳定性良好，在不同寄主上检测的Ct平均值差值在0.25至0.34；能检测出INSV病毒含量6.99拷贝·μl-1，具有微量检测的效果；检测的特异性强，只有INSV有荧光信号。

公开(公告)号：CN101792820A

公开(公告)日：2010-08-04

申请号：CN201010125250.X

申请日：2010-03-16

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 刘雅婷 ,  郑元仙 ,  徐小刚 ,  李永忠 ,  孙文涛 ,  仵发静 ,  陈雪娇

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明是一种快速检测和鉴定凤仙花坏死斑病毒的分子生物学方法及其引物，属植物病毒分子生物学检测鉴定领域。本发明提供3对引物，其中引物L6如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示；引物M6如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示；引物S3如SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示。用其中任一对引物进行RT-PCR扩增，序列比对相似性大于90％，样品即为INSV。用上述3对引物进行RT-PCR扩增，当分别扩增出744bp、637bp和542bp左右的片段时，不需再进行克隆、测序和序列比对，即可确认样品为INSV，可以避免该检测中假阳性结果，简化了检测过程。