突变型LoxP元件、其表达载体和在鱼类基因工程育种中的应用

    公开(公告)号:CN118147146B

    公开(公告)日:2024-09-17

    申请号:CN202410344887.X

    申请日:2024-03-25

    Abstract: 本发明属于基因工程技术领域,尤其涉及一种突变型LoxP元件、其表达载体和在鱼类基因工程育种中的应用。所述突变型LoxP元件的核苷酸序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示。本发明以Lox66为基础,对间隔序列的多个碱基进行突变,筛选得到如SEQ ID NO.1‑3所示的突变型LoxP元件,将其和Lox71配合使用构建目的基因Cre‑Lox重组系统,有利于提高目的基因在宿主细胞中的转化效果,提高其表达效率和持续表达的稳定性,确保底盘家系稳定遗传,并有利于显著提高重组在分子间发生的效率,适用于因更换不同重组目标蛋白而需要频繁进行基因编辑和置换的底盘家系构建。

    一种诱导黄河鲤雌鱼一年性成熟的温度处理方法

    公开(公告)号:CN116941551B

    公开(公告)日:2023-12-29

    申请号:CN202311080857.4

    申请日:2023-08-25

    Abstract: 本发明公开了一种诱导黄河鲤雌鱼一年性成熟的温度处理方法,包括以下步骤:(1)进行290天28℃水体恒温饲养,促进黄河鲤个体生长及营养积累,使其在10个月时间内卵巢从I期发育到III期;(2)设置38天的变温处理,依次为23℃、18℃水温条件下各饲养7天,13℃水温条件下饲养14天,18℃水温条件下饲养10天,利用温度升降促进黄河鲤性腺发育,卵巢迅速发育至IV期。本发明温度处理方法可以使黄河鲤雌鱼的性腺在一年达到性成熟并正常产卵受精,从而极大地缩短鲤繁殖周期,节省鲤家系构建、传代及实验材料获取时间。

    两端包含LoxP位点的表达GFP蛋白的质粒及其构建方法和应用

    公开(公告)号:CN117051039A

    公开(公告)日:2023-11-14

    申请号:CN202310888988.9

    申请日:2023-07-19

    Abstract: 本发明公开了两端包含LoxP位点的表达GFP蛋白的质粒及其构建方法和应用,该质粒的构建方法包括:S1:在GFP表达元件两侧设计两个不同类型的同向LoxP位点;S2:将两个不同LoxP位点分别连入正反向引物,以pEGFP‑N3质粒为模板,扩增GFP基因的表达元件,包括启动子、编码区和5′UTR区;S3:连接至pMD18‑T载体,阳性检测正确后,从插入序列外侧设计正反向引物,扩增出两端包括LoxP位点的GFP基因表达元件组合;S4:将此元件组合连入pTol2‑MCS质粒多克隆位点处,构建完成pTol2‑GFP质粒。本发明质粒转入鳜受精卵后,获得发绿色荧光的鳜转基因底盘家系,从而获得宿主基因组的定点编辑位点,适用于后续不同转基因目标家系的同塘高效筛选和构建,为鱼类基因工程育种提供帮助,极大提高鱼类遗传育种效率。

    一种诱导黄河鲤雌鱼一年性成熟的温度处理方法

    公开(公告)号:CN116941551A

    公开(公告)日:2023-10-27

    申请号:CN202311080857.4

    申请日:2023-08-25

    Abstract: 本发明公开了一种诱导黄河鲤雌鱼一年性成熟的温度处理方法,包括以下步骤:(1)进行290天28℃水体恒温饲养,促进黄河鲤个体生长及营养积累,使其在10个月时间内卵巢从I期发育到III期;(2)设置38天的变温处理,依次为23℃、18℃水温条件下各饲养7天,13℃水温条件下饲养14天,18℃水温条件下饲养10天,利用温度升降促进黄河鲤性腺发育,卵巢迅速发育至IV期。本发明温度处理方法可以使黄河鲤雌鱼的性腺在一年达到性成熟并正常产卵受精,从而极大地缩短鲤繁殖周期,节省鲤家系构建、传代及实验材料获取时间。

    两端包含LoxP位点的表达GFP蛋白的质粒及其构建方法和应用

    公开(公告)号:CN117051039B

    公开(公告)日:2024-05-24

    申请号:CN202310888988.9

    申请日:2023-07-19

    Abstract: 本发明公开了两端包含LoxP位点的表达GFP蛋白的质粒及其构建方法和应用,该质粒的构建方法包括:S1:在GFP表达元件两侧设计两个不同类型的同向LoxP位点;S2:将两个不同LoxP位点分别连入正反向引物,以pEGFP‑N3质粒为模板,扩增GFP基因的表达元件,包括启动子、编码区和5′UTR区;S3:连接至pMD18‑T载体,阳性检测正确后,从插入序列外侧设计正反向引物,扩增出两端包括LoxP位点的GFP基因表达元件组合;S4:将此元件组合连入pTol2‑MCS质粒多克隆位点处,构建完成pTol2‑GFP质粒。本发明质粒转入鳜受精卵后,获得发绿色荧光的鳜转基因底盘家系,从而获得宿主基因组的定点编辑位点,适用于后续不同转基因目标家系的同塘高效筛选和构建,为鱼类基因工程育种提供帮助,极大提高鱼类遗传育种效率。

    一种培育黄河鲤四季产卵的方法

    公开(公告)号:CN117958185A

    公开(公告)日:2024-05-03

    申请号:CN202410286831.3

    申请日:2024-03-13

    Abstract: 本发明属于水产养殖技术领域,尤其涉及一种培育黄河鲤四季产卵的方法,方法包括:对产后的亲鱼注射产后康复剂和进行体表消毒,之后放入28℃高温培育池内,培育亲鱼的卵巢发育达到Ⅲ期‑IV期;将高温培育池内发育良好的亲鱼放入16℃低温培育池内,使亲鱼的卵巢发育维持在IV期;将低温培育池内卵巢发育良好的亲鱼放入22℃催熟催产池内,进行催熟和催产,得到产卵的亲鱼。本发明通过在28℃高温强化培育促进卵巢成熟,在16℃低温培育使卵巢发育维持以及在22℃促熟和催产,可实现一年四季皆有黄河鲤能够正常产卵并受精,及时为生物实验提供成熟的鱼卵及优质的胚胎;而且有利于生产反季节苗种,提高苗种生产利润。

    筛选二倍体真核生物抗性关联SNP位点的方法及其应用

    公开(公告)号:CN117912548A

    公开(公告)日:2024-04-19

    申请号:CN202410082355.3

    申请日:2024-01-19

    Abstract: 本发明属于动物遗传育种技术领域,尤其涉及一种筛选二倍体真核生物抗性关联SNP位点的方法及其应用,所述方法包括:S1、根据表型将所述实验群体划分为抗性组和易感组,统计每一个SNP位点在不同组内的基因型组合;S2、通过位点在抗性组和易感组之间基因型组合差异识别易感基因型,构建分析列表,按照预设规则,将分析列表中涉及易感组样本为易感纯合基因型的单元格赋值为“0”,否则为“1”,得到SNP位点在所述易感组样本中的关联列表;S3、寻找关联列表中易感基因型高度富集的最优位点组合。本发明有利于快速准确识别出与抗性表型显著相关联的SNP位点组合,将大大缩短育种年限,具有广阔的应用前景。

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