公开(公告)号：CN119224152A

公开(公告)日：2024-12-31

申请号：CN202411359003.4

申请日：2024-09-27

Applicant: 中国海洋大学 ,  内蒙古国家乳业技术创新中心有限责任公司

Inventor： 张兰威 ,  曾剑华 ,  公不民 ,  邹俊哲 ,  何剑

IPC: G01N30/02 ,  G01N30/72 ,  C12P21/06 ,  C12N9/50 ,  C12N15/70

Abstract: 本申请提供一种利用分子动力学模拟结合蛋白质网络结构挖掘蛋白酶催化性能远端调控关键氨基酸，首先通过温度扰动的迭代构象动力学结合最短路径分析挖掘木瓜蛋白酶可能存在的远端调控路径，基于最短路径残基贡献率以及分子间相互作用和残基溶剂化面积可及性确定关键路径的远端调控氨基酸残基；最后利用异源表达技术表达木瓜蛋白酶突变体，通过分离纯化、体外活化获得木瓜蛋白酶突变体纯品，通过液质联用技术验证关键氨基酸残基对木瓜蛋白酶催化专一性的影响；得到木瓜蛋白酶催化性能的潜在调控路径和关键氨基酸残基。本发明能够实现提高木瓜蛋白酶水解专一性进而靶向降解αs1‑CN主要过敏原表位的目的，为强化木瓜蛋白酶靶向消减CN抗原性提供理论支撑。

公开(公告)号：CN119144588A

公开(公告)日：2024-12-17

申请号：CN202411359350.7

申请日：2024-09-27

Applicant: 中国海洋大学

Inventor： 张兰威 ,  曾剑华 ,  公不民 ,  邹俊哲

IPC: C12N9/50 ,  C12P21/06 ,  G01N30/02 ,  G01N30/72

Abstract: 本申请提供一种提高αs1‑CN主要表位的靶向降解方法，经柠檬酸二氢胆碱能通过定向修饰木瓜蛋白酶位于loop2区域的82号酪氨酸和83号精氨酸残基，然后通过Loop2→Loop1→α3→α2路径增强催化三联体表面静电势，调控底物结合通道入口处的Trp177的吲哚平面从水平方向转变为垂直方向，进而形成一个狭窄的底物结合通道，最后木瓜蛋白酶对酪氨酸残基水解选择性的二项式概率对数比值由1.4提高至8.7，对酪氨酸残基的偏好性提高了6.15倍，从而实现提高了木瓜蛋白酶对αs1‑CN主要表位Y154‑T174的靶向降解能力，其水解物与IgE和IgG结合能力由7.28％和12.42％分别降至为5.36％和8.55％。本发明经柠檬酸二氢胆碱修饰后的木瓜蛋白酶实现了增强其对αs1‑CN主要表位的降解，同时还尽可能减少其功能的丧失。