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公开(公告)号:CN113046479A
公开(公告)日:2021-06-29
申请号:CN202110293758.9
申请日:2021-03-19
Applicant: 中国水产科学研究院珠江水产研究所
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种锦鲤疱疹病毒RPA引物组、探针和检测试剂盒及其应用,所述RPA引物组序列如SEQ ID NO.4~19所示,所述探针序列如SEQ ID NO.2~3所示。本发明中提供的探针和引物灵敏度高,检测效果稳定,特异性强。基于此构建的检测试剂及检测试剂盒均具有很高的检测灵敏度,最低检测限为100copy/μL,检测时间仅需4~18min,相比KHV检测金标准PCR及real‑time PCR均具有时间和检测精度上的优势,具有极高的应用价值。
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公开(公告)号:CN113214407A
公开(公告)日:2021-08-06
申请号:CN202110243753.5
申请日:2021-03-05
Applicant: 中国水产科学研究院珠江水产研究所
Abstract: 本发明公开了一种II型草鱼呼肠孤病毒VP4‑NS38融合蛋白基因、表达载体、菌株及其应用。本发明通过融合PCR的方式将能够引起草鱼产生不同方式免疫应答反应的VP4和NS38蛋白以柔性linker连接,构建能够在枯草芽孢杆菌芽孢体中融合表达GCRVVP4‑NS38蛋白的重组芽孢杆菌。以该重组芽孢杆菌口服免疫草鱼能够刺激鱼体产生具有中和活性的黏膜抗体和血清抗体,而且能够引起草鱼产生体液免疫反应,也能够引起草鱼产生细胞免疫反应;同时还能够减少草鱼在病毒感染过程中的炎症反应。具有很好的安全性,对草鱼的生长不产生显著影响,也不会对草鱼的组织器官造成病理损害,可以应用在草鱼出血病口服疫苗的研究中。
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公开(公告)号:CN112048571B
公开(公告)日:2021-07-20
申请号:CN202010915296.5
申请日:2020-09-03
Applicant: 中国水产科学研究院珠江水产研究所
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6848 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了草鱼呼肠孤病毒II型巢式RT‑PCR检测引物组、试剂盒及其应用。本发明设计得到草鱼呼肠孤病毒II型巢式RT‑PCR引物组,并基于该引物组,通过特定法扩增体系和条件检测草鱼呼肠孤病毒II型。其PCR反应第一次扩增可以检测到103稀释的cDNA浓度,第二次扩增可以检测到104次稀释的cDNA浓度,特异性强,比现有国标中GCRVⅡ型病毒的检测敏感性更高。
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公开(公告)号:CN112680544B
公开(公告)日:2021-11-26
申请号:CN202011577941.3
申请日:2020-12-28
Applicant: 中国水产科学研究院珠江水产研究所
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种用于检测Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒的实时荧光RT‑RPA引物、探针和试剂盒及其应用。本发明通过基因Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒特定的保守区域设计筛选得到引物和探针的最佳组合,其检测灵敏度高、特异性好、检测效果稳定;而且与包括Ⅰ型GCRV和Ⅲ型GCRV在内的9种鱼类常见病毒和草鱼易感染细菌维氏气单胞菌、嗜水气单胞菌均无交叉反应,表现出良好的特异性。基于本发明所建立的实时荧光RT‑RPA引物、探针及检测试剂盒,对于基因Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒检测灵敏度为101copy/μl,检测灵敏度比巢氏PCR方法高10倍,不需要大型仪器设备,检测时间仅需4.5~30min,大大缩短了检测时间,可用于现场快速检测。
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公开(公告)号:CN112680544A
公开(公告)日:2021-04-20
申请号:CN202011577941.3
申请日:2020-12-28
Applicant: 中国水产科学研究院珠江水产研究所
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种用于检测Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒的实时荧光RT‑RPA引物、探针和试剂盒及其应用。本发明通过基因Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒特定的保守区域设计筛选得到引物和探针的最佳组合,其检测灵敏度高、特异性好、检测效果稳定;而且与包括Ⅰ型GCRV和Ⅲ型GCRV在内的9种鱼类常见病毒和草鱼易感染细菌维氏气单胞菌、嗜水气单胞菌均无交叉反应,表现出良好的特异性。基于本发明所建立的实时荧光RT‑RPA引物、探针及检测试剂盒,对于基因Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒检测灵敏度为101copy/μl,检测灵敏度比巢氏PCR方法高10倍,不需要大型仪器设备,检测时间仅需4.5~30min,大大缩短了检测时间,可用于现场快速检测。
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公开(公告)号:CN112280740A
公开(公告)日:2021-01-29
申请号:CN202011164484.5
申请日:2020-10-27
Applicant: 中国水产科学研究院珠江水产研究所
Abstract: 本发明公开了一株稀有鮈鲫脑细胞系,分类命名稀有鮈鲫脑细胞系GrB,保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:C2019247。该稀有鮈鲫脑细胞系对多种水生生物病毒具有敏感性,接毒后均出现细胞病变,可应用于病原特性研究、水体毒性评价、疫苗研制等方面。
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公开(公告)号:CN113214407B
公开(公告)日:2022-03-15
申请号:CN202110243753.5
申请日:2021-03-05
Applicant: 中国水产科学研究院珠江水产研究所
Abstract: 本发明公开了一种II型草鱼呼肠孤病毒VP4‑NS38融合蛋白基因、表达载体、菌株及其应用。本发明通过融合PCR的方式将能够引起草鱼产生不同方式免疫应答反应的VP4和NS38蛋白以柔性linker连接,构建能够在枯草芽孢杆菌芽孢体中融合表达GCRVVP4‑NS38蛋白的重组芽孢杆菌。以该重组芽孢杆菌口服免疫草鱼能够刺激鱼体产生具有中和活性的黏膜抗体和血清抗体,而且能够引起草鱼产生体液免疫反应,也能够引起草鱼产生细胞免疫反应;同时还能够减少草鱼在病毒感染过程中的炎症反应。具有很好的安全性,对草鱼的生长不产生显著影响,也不会对草鱼的组织器官造成病理损害,可以应用在草鱼出血病口服疫苗的研究中。
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公开(公告)号:CN113046479B
公开(公告)日:2021-11-26
申请号:CN202110293758.9
申请日:2021-03-19
Applicant: 中国水产科学研究院珠江水产研究所
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种锦鲤疱疹病毒RPA引物组、探针和检测试剂盒及其应用,所述RPA引物组序列如SEQ ID NO.4~19所示,所述探针序列如SEQ ID NO.2~3所示。本发明中提供的探针和引物灵敏度高,检测效果稳定,特异性强。基于此构建的检测试剂及检测试剂盒均具有很高的检测灵敏度,最低检测限为100copy/μL,检测时间仅需4~18min,相比KHV检测金标准PCR及real‑time PCR均具有时间和检测精度上的优势,具有极高的应用价值。
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公开(公告)号:CN112553141A
公开(公告)日:2021-03-26
申请号:CN202010866834.6
申请日:2020-08-26
Applicant: 中国水产科学研究院珠江水产研究所
Abstract: 本发明公开了一种稀有鮈鲫鳔细胞系,保藏编号为CCTCC NO:C 2019243;并且公开了上述稀有鮈鲫鳔细胞系构建培养方法,具体包括稀有鮈鲫鳔细胞的原代培养、稀有鮈鲫鳔细胞的传代培养以及细胞的冻存与复苏步骤;而且还公开了所述稀有鮈鲫鳔细胞系诱导转化方法,具体包括配制N‑甲基‑N’‑硝基‑N‑亚硝基胍溶液、N‑甲基‑N’‑硝基‑N‑亚硝基胍诱导稀有鮈鲫鳔细胞以及诱导后低血清培养过程。本发明公开的一种稀有鮈鲫鳔细胞系及其培养方法和诱导转化方法,为稀有鮈鲫在水产动物转化研究方面应用提供的基础,能够扩大其在生物实验中的应用。
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公开(公告)号:CN112048571A
公开(公告)日:2020-12-08
申请号:CN202010915296.5
申请日:2020-09-03
Applicant: 中国水产科学研究院珠江水产研究所
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6848 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了草鱼呼肠孤病毒II型巢式RT‑PCR检测引物组、试剂盒及其应用。本发明设计得到草鱼呼肠孤病毒II型巢式RT‑PCR引物组,并基于该引物组,通过特定法扩增体系和条件检测草鱼呼肠孤病毒II型。其PCR反应第一次扩增可以检测到103稀释的cDNA浓度,第二次扩增可以检测到104次稀释的cDNA浓度,特异性强,比现有国标中GCRVⅡ型病毒的检测敏感性更高。
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