一种高效重组痘苗病毒载体及其建立方法

    公开(公告)号:CN109536529A

    公开(公告)日:2019-03-29

    申请号:CN201811502766.4

    申请日:2018-12-10

    Inventor: 郭斐 许丰雯 张迪

    Abstract: 本发明建立了一种高效重组痘苗病毒载体的系统,包括高效重组痘苗病毒载体及其建立方法。本发明利用CRISPR-Cas9技术敲除痘苗病毒天坛株TK区,然后转染带有EGFP的重组质粒pJ2R-EGFP。通过荧光筛选,获得缺失TK并插入EGFP的重组病毒,建立一种高效重组痘苗病毒载体的系统。通过分子克隆技术、Western Blot实验、免疫荧光、病毒噬斑形成试验,发现在第一轮重组病毒筛选过程中重组率比传统同源重组方法有所提高。进一步利用PCR技术、琼脂糖凝胶电泳、测序验证得到的重组病毒准确在特定位点被改造。本发明将痘苗病毒载体的重组率提高,为其在疫苗载体构建、肿瘤免疫治疗等方面提供应用价值。

    一种高效重组且无筛选标记的痘苗病毒载体及其建立方法

    公开(公告)号:CN110029128A

    公开(公告)日:2019-07-19

    申请号:CN201910370701.7

    申请日:2019-05-06

    Inventor: 郭斐 许丰雯 张迪

    Abstract: 本发明公开了一种高效重组且无筛选标记的痘苗病毒载体及其建立方法,利用CRISPR-Cas9技术敲除痘苗病毒天坛株TK区,然后转染带有EGFP的重组质粒pJ2R-EGFP-LoxP。通过荧光筛选,获得缺失TK并插入EGFP的重组病毒,经计算比传统同源重组的效率提高几十倍,建立一种高效重组痘苗病毒载体的系统。在此重组病毒载体的基础上,利用Cre-LoxP系统将重组病毒载体中的筛选标记EGFP删除,通过分子克隆技术、Western Blot实验、免疫荧光、PCR技术等验证得到的重组病毒准确在特定位点删除EGFP。本发明建立一种高效重组痘苗病毒载体的系统,并将痘苗病毒载体的筛选标记删除,提高了在疫苗载体构建、肿瘤免疫治疗等方面的应用价值。

    一种基于痘苗病毒天坛株的新型冠状病毒疫苗

    公开(公告)号:CN113337481A

    公开(公告)日:2021-09-03

    申请号:CN202110614059.X

    申请日:2021-06-02

    Abstract: 本发明公开了一种基于痘苗病毒天坛株的新型冠状病毒疫苗,在我国自主研发的天花疫苗株痘苗病毒天坛株的基础上,通过转染带有新冠刺突蛋白S编码基因及TK区同源臂的重组质粒,经过重组及筛选过程,获得在TK区导入新冠S蛋白编码序列的重组病毒TK‑S,重组病毒感染细胞后能检测到新冠S蛋白的表达。随后,将此重组病毒免疫小鼠,在小鼠血清中检测到较高的S特异性抗体滴度及中和抗体滴度。本发明建立了一种基于痘苗病毒天坛株的表达S蛋白的新型冠状病毒疫苗,可以解决目前新冠对全球公共卫生健康造成的威胁,是治疗和预防新型冠状病毒感染的得力措施。

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