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公开(公告)号：CN114717204B
公开(公告)日：2023-12-26
申请号：CN202210220569.3
申请日：2022-03-08
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C12N7/01 , C12N15/38 , C12N15/869 , A61K39/245 , A61P31/22
Abstract: 本发明公开了一种复制缺陷型伪狂犬病病毒构建方法和应用。所述的复制缺陷型伪狂犬病病毒是在包含PRV全基因组的BAC感染性克隆的基础上，将其中的gB基因编码序列中的第151或196位精氨酸突变为终止密码子TGA后得到的。本发明用tRNA反密码子编辑(Anticodon‑engineeredtransferRNAs，ACE‑tRNAs)技术实现DNA病毒提前终止密码子(Prematurestopcodon，PTC)的高效通读并应用于动物病毒疫苗的研究。证明了基于ACE‑tRNAs技术研究的复制缺陷病毒作为疫苗应用的可行性。本发明的提出为伪狂犬病病毒的防治提供了一种新的技术手段，同时也为解决一直困扰人们的疫苗安全性和有效性的问题提供了一种新的思路，代表了一种有前途的疫苗研究工具，为其它疫苗研究困难的病毒新型疫苗开发打开一扇新的大门。
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公开(公告)号：CN114656553A
公开(公告)日：2022-06-24
申请号：CN202210267146.7
申请日：2022-03-17
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C07K16/08 , C12N5/20 , G01N33/569 , G01N33/577 , G01N33/58 , G01N33/543
Abstract: 本发明公开了一株识别非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)P72蛋白的单克隆抗体、含有该单克隆抗体的试剂盒及其应用。其中，能够特异性识别并阻断ASFV P72抗体的单克隆抗体由保藏编号为CGMCC NO.45030的杂交瘤细胞株分泌产生。通过间接免疫荧光实验和WB试验，鉴定所得到的单克隆抗体特异性识别P72蛋白构象表位，阻断ELISA试验结果表明，该单克隆抗体可以竞争性阻断猪血清中ASFV抗体与P72蛋白结合。本发明以偶联HRP单克隆抗体为竞争抗体，建立了一种阻断ELISA方法，该ELISA方法可以特异性检测ASFV感染的猪血清中抗体水平，操作简便，特异性好，敏感性高。本发明为ASFV感染的临床诊断和流行病学调查提供了一种新的检测手段。
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公开(公告)号：CN113801854A
公开(公告)日：2021-12-17
申请号：CN202110995235.9
申请日：2021-08-27
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C12N5/20 , C07K16/10 , G01N33/577 , G01N33/569 , G01N33/543 , C12R1/91
Abstract: 本发明公开了分泌欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(European type Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,EU‑type PRRSV)特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞系及其应用，还公开了由该杂交瘤细胞系分泌的抗欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的特异性单克隆抗体及竞争ELISA方法的建立。该杂交瘤细胞系命名为EU1，其微生物保藏号是：CGMCC NO.23019。本发明的杂交瘤细胞系能够稳定分泌特异性识别EU‑type PRRSV的单克隆抗体，可用于特异性针对EU‑type PRRSV的竞争ELISA方法的建立。本发明的EU1杂交瘤细胞系及其分泌的单克隆抗体可以用于制备竞争法抗体诊断试剂盒，基于EU1建立的抗体鉴别诊断试剂盒可以区分EU‑type PRRSV和其它类型PRRSV的感染。
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公开(公告)号：CN116444682B
公开(公告)日：2023-12-08
申请号：CN202310342828.4
申请日：2023-03-31
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C07K19/00 , C12N15/62 , C12N15/867 , C12N5/10 , A61K39/395 , A61K39/385 , A61P31/14
Abstract: 本发明公开了一种靶向降解PRRSV关键复制酶的生物型蛋白降解靶向嵌合体及其应用。所述的生物型蛋白降解靶向嵌合体由1至多个PRRSVnsp9纳米抗体nsp9nb及/或nsp2纳米抗体nsp2nb串联后再与E3泛素连接酶接头蛋白SPOP中BTB结构域融合后得到。本发明利用筛选出的特异性结合PRRSV关键复制酶Nsp2，Nsp9蛋白的纳米抗体，并用纳米抗体替代E3泛素连接酶复合体(SPOP)底物识别结构域，构建靶向降解PRRSV关键复制酶的生物型蛋白降解靶向嵌合体。本发明的提出为PRRS的治疗以及抗PRRS育种提供了新的技术手段。
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公开(公告)号：CN113308463A
公开(公告)日：2021-08-27
申请号：CN202110516652.0
申请日：2021-05-12
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了经过反密码子编辑的tRNA作为分子开关在精准控制蛋白表达及病毒复制中的应用。所述的经过反密码子编辑的tRNA携带正常氨基酸，同时能够识别所述的提前终止密码子，并将携带的氨基酸插入到相应的位置，从而使得蛋白以及复制缺陷型病毒能够在该tRNA存在下完成表达及复制。该方法并不依赖特殊的氨酰tRNA合成酶以及UAA。仅对tRNA的反密码子编码序列进行突变改造就可以实现携带正常氨基酸的tRNA识别终止密码子并将携带的氨基酸插入到相应的位置，从而实现对蛋白表达以及复制缺陷型病毒精准调控，提高疫苗的安全性。本发明提供了一种用于蛋白或病毒精准控制的新方法，特别是在新型的复制缺陷型病毒疫苗的生产中将具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN111849924A
公开(公告)日：2020-10-30
申请号：CN202010580477.7
申请日：2020-06-23
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了类NADC30猪蓝耳病强毒株、弱毒株及其应用。本发明的一种类NADC30猪蓝耳病强毒株，命名为类NADC30猪蓝耳病病毒SD株，其微生物保藏号是：CGMCC NO.19691。通过对该SD株进行致弱培养，本发明还获得了一株类NADC30猪蓝耳病弱毒株，命名为类NADC30猪蓝耳病病毒SD-R株，其微生物保藏号是：CGMCC NO.19692。实验证明，本发明的SD株具有毒力强、对仔猪致病力稳定的特征，可用于检验预防或治疗类NADC30猪繁殖与呼吸综合征；本发明的弱毒疫苗株SD-R株具有安全性高、保护效果好的特征，可用于预防类NADC30猪繁殖与呼吸综合征。因此，本发明的SD株及其弱毒疫苗SD-R株可用于制备成防治类NADC30猪繁殖与呼吸综合征的单苗或联苗(活或灭活疫苗)等，也可以制备成诊断类NADC30猪繁殖与呼吸综合征的诊断试剂。
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公开(公告)号：CN110484516A
公开(公告)日：2019-11-22
申请号：CN201910842743.6
申请日：2019-09-06
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
IPC: C12N7/01 , C12N15/113 , C12N15/70 , C12N15/66 , C12N15/90
Abstract: 一种用CRISPR系统将量子点标记至病毒核酸的方法和应用，它涉及病毒领域，本发明的目的是为了解决可视化研究伪狂犬病病毒中，采用目前已有方法将量子点标记至伪狂犬病病毒囊膜上，很有可能影响病毒对宿主细胞的侵染性的问题，本发明提出了一种量子点标记病毒核酸的新方法，标记后观察PRV侵入宿主细胞的动态过程，有望揭示PRV对宿主细胞的侵染机制，为我国猪伪狂犬病的防控研究提供理论依据，本发明应用于伪狂犬病病毒领域。
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公开(公告)号：CN110484516B
公开(公告)日：2022-12-27
申请号：CN201910842743.6
申请日：2019-09-06
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
IPC: C12N7/01 , C12N15/113 , C12N15/70 , C12N15/66 , C12N15/90
Abstract: 一种用CRISPR系统将量子点标记至病毒核酸的方法和应用，它涉及病毒领域，本发明的目的是为了解决可视化研究伪狂犬病病毒中，采用目前已有方法将量子点标记至伪狂犬病病毒囊膜上，很有可能影响病毒对宿主细胞的侵染性的问题，本发明提出了一种量子点标记病毒核酸的新方法，标记后观察PRV侵入宿主细胞的动态过程，有望揭示PRV对宿主细胞的侵染机制，为我国猪伪狂犬病的防控研究提供理论依据，本发明应用于伪狂犬病病毒领域。
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公开(公告)号：CN109517797A
公开(公告)日：2019-03-26
申请号：CN201811201822.0
申请日：2018-10-16
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了一种表达猪繁殖障碍与呼吸综合症病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)受体CD163的猪永生化的肺泡巨噬细胞细胞系，所述的细胞系命名为PAM-Tang-20，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其菌种保藏编号为：CGMCC No.13591。实验证明，本发明建立的细胞系能够高表达CD163受体，是PRRSV的易感细胞，可以广泛应用于PRRSV的增殖、PRRSV临床毒株的分离、疫苗生产以及PRRSV相关基础研究等。本发明的提出为猪繁殖障碍与呼吸综合症病毒的体外培养提供了一种有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN101818204B
公开(公告)日：2013-03-27
申请号：CN201010163049.0
申请日：2010-04-30
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 , 广东蓝岛生物技术有限公司
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明公开了一种检测猕猴属动物TRIM5基因座突变的PCR方法，包括：(1)从猕猴属动物毛发中提取DNA；(2)以SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2为引物进行PCR扩增；(3)如果扩增产物为一条2300-2400bp片段，则待检测动物TRIM5基因座没有发生突变；如果扩增产物分别为2300-2400bp和3000-3150bp的两条片段，则TRIM5基因发生杂合突变；如果扩增产物仅为一条3000-3150bp的片段，则TRIM5基因座发生纯合突变。本发明方法能够准确的检测出猕猴属动物的TRIMCyp基因型，可以用于调查TRIMCyp在中国地区猕猴中分布，筛选阳性个体。
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