一种抑制人腺病毒增殖药物的高通量筛选方法及其应用

    公开(公告)号:CN112592953A

    公开(公告)日:2021-04-02

    申请号:CN202011514304.1

    申请日:2020-12-21

    Inventor: 谷峰 商璐

    Abstract: 本发明公开一种抑制人腺病毒增殖药物的高通量筛选方法及其应用。该专利中为标记GFP的人腺病毒在感染HEK‑293细胞后能表达绿色荧光蛋白,使感染的细胞在荧光显微镜下呈绿色。抗人腺病毒的药物活性通过以下实现,利用流式细胞术检测HEK‑293细胞在添加抗腺病毒药物和人腺病毒后,培养基上清中的腺病毒含量的变化。具体操作为,取适量的病毒上清重新加入一定量的HEK‑293细胞中,用流式细胞术测定细胞中被腺病毒感染的细胞的比率(带有绿色荧光的细胞),以此来评估添加药物对腺病毒增殖是否有明显的抑制作用。此方法,可以在体外快速、简便,低廉,有效,高通量的筛选候选药物分子是否具有抑制人腺病毒的作用。本专利将加速新型抗人腺病毒药物的研发。

    三基因报告系统及其建立方法和应用

    公开(公告)号:CN110305897A

    公开(公告)日:2019-10-08

    申请号:CN201910484405.X

    申请日:2019-06-05

    Inventor: 谷峰 杨发誉

    Abstract: 本发明公开一种快速测定基因组编辑活性的三基因报告系统,该报告系统包括三基因报告细胞系和基因编辑系统活性的快速检测体系。所述三基因报告细胞系为在HEK-293细胞AAVS1位点整合有TK-Neo-T2A-GFP-Ires-Puro基因的单克隆HEK-293-AAVS-TK-Neo-T2A-GFP细胞系,TK-Neo-T2A-GFP基因的序列如SEQ ID NO.1所示;所述基因编辑系统活性的快速检测体系为针对三报告基因TK、Neo和GFP基因分别设计单链引导RNA,构建质粒后转染报告细胞系。利用本发明的三基因报告系统可以在体外快速、有效、高通量的对基因组编辑工具的活性进行检测,有助于基因编辑系统的快速筛选和优化,为基因编辑工具的研发提供一个高效的筛选平台。

    EYFP敲入到Et.Actin基因的鸡柔嫩艾美尔球虫虫株的制备

    公开(公告)号:CN113583876B

    公开(公告)日:2024-07-09

    申请号:CN202110882861.7

    申请日:2021-08-02

    Inventor: 谷峰 程培培

    Abstract: 本发明公开EYFP敲入到Et.Actin基因的鸡柔嫩艾美尔球虫虫株的制备。该专利将FnCas12a蛋白,体外合成的crRNA和同源重组片段(含有P2A‑DHFR‑EYFP表达框的Et.Actin基因)利用Lonza 4D‑Nucleofector核转仪导入鸡柔嫩艾美尔球虫子孢子,实现对鸡柔嫩艾美尔球虫的编辑。将编辑虫株经过鸡体内乙胺嘧啶筛选,获得高纯度的基因编辑虫株。然后,利用PCR和Sanger测序技术对基因编辑虫株进行验证,证明EYFP成功标记了Et.Actin基因。通过细胞培养该虫株的子孢子并感染鸡后,取盲肠粘膜并涂片显示该EYFP在基因编辑虫株的整个生活史中都有表达。此基因编辑方法能够对鸡球虫的基因进行定点标记,有助于解析球虫基因的功能。本专利对新型抗球虫药物和疫苗的研发也具有重要意义。

    三基因报告系统及其建立方法和应用

    公开(公告)号:CN110305897B

    公开(公告)日:2023-03-31

    申请号:CN201910484405.X

    申请日:2019-06-05

    Inventor: 谷峰 杨发誉

    Abstract: 本发明公开一种快速测定基因组编辑活性的三基因报告系统,该报告系统包括三基因报告细胞系和基因编辑系统活性的快速检测体系。所述三基因报告细胞系为在HEK‑293细胞AAVS1位点整合有TK‑Neo‑T2A‑GFP‑Ires‑Puro基因的单克隆HEK‑293‑AAVS‑TK‑Neo‑T2A‑GFP细胞系,TK‑Neo‑T2A‑GFP基因的序列如SEQ ID NO.1所示;所述基因编辑系统活性的快速检测体系为针对三报告基因TK、Neo和GFP基因分别设计单链引导RNA,构建质粒后转染报告细胞系。利用本发明的三基因报告系统可以在体外快速、有效、高通量的对基因组编辑工具的活性进行检测,有助于基因编辑系统的快速筛选和优化,为基因编辑工具的研发提供一个高效的筛选平台。

    EYFP敲入到Et.Actin基因的鸡柔嫩艾美尔球虫虫株的制备

    公开(公告)号:CN113583876A

    公开(公告)日:2021-11-02

    申请号:CN202110882861.7

    申请日:2021-08-02

    Inventor: 谷峰 程培培

    Abstract: 本发明公开EYFP敲入到Et.Actin基因的鸡柔嫩艾美尔球虫虫株的制备。该专利将FnCas12a蛋白,体外合成的crRNA和同源重组片段(含有P2A‑DHFR‑EYFP表达框的Et.Actin基因)利用Lonza 4D‑Nucleofector核转仪导入鸡柔嫩艾美尔球虫子孢子,实现对鸡柔嫩艾美尔球虫的编辑。将编辑虫株经过鸡体内乙胺嘧啶筛选,获得高纯度的基因编辑虫株。然后,利用PCR和Sanger测序技术对基因编辑虫株进行验证,证明EYFP成功标记了Et.Actin基因。通过细胞培养该虫株的子孢子并感染鸡后,取盲肠粘膜并涂片显示该EYFP在基因编辑虫株的整个生活史中都有表达。此基因编辑方法能够对鸡球虫的基因进行定点标记,有助于解析球虫基因的功能。本专利对新型抗球虫药物和疫苗的研发也具有重要意义。

    一种抑制人腺病毒增殖药物的高通量筛选方法及其应用

    公开(公告)号:CN112592953B

    公开(公告)日:2023-06-27

    申请号:CN202011514304.1

    申请日:2020-12-21

    Inventor: 谷峰 程培培

    Abstract: 本发明公开一种抑制人腺病毒增殖药物的高通量筛选方法及其应用。该专利中为标记GFP的人腺病毒在感染HEK‑293细胞后能表达绿色荧光蛋白,使感染的细胞在荧光显微镜下呈绿色。抗人腺病毒的药物活性通过以下实现,利用流式细胞术检测HEK‑293细胞在添加抗腺病毒药物和人腺病毒后,培养基上清中的腺病毒含量的变化。具体操作为,取适量的病毒上清重新加入一定量的HEK‑293细胞中,用流式细胞术测定细胞中被腺病毒感染的细胞的比率(带有绿色荧光的细胞),以此来评估添加药物对腺病毒增殖是否有明显的抑制作用。此方法,可以在体外快速、简便,低廉,有效,高通量的筛选候选药物分子是否具有抑制人腺病毒的作用。本专利将加速新型抗人腺病毒药物的研发。

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