公开(公告)号：CN108640866B

公开(公告)日：2021-08-31

申请号：CN201810557928.8

申请日：2018-06-01

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 刘尚钟 ,  李奇博 ,  廖敏 ,  崔永亮 ,  王保民

IPC: C07D207/404 ,  C07K14/765 ,  C07K14/77 ,  C07K14/795 ,  C07K16/44 ,  G01N33/535 ,  G01N33/53 ,  G01N30/02

Abstract: 本发明公开了一种氟苯虫酰胺抗原及其制备方法与应用。该氟苯虫酰胺抗原如式C所示，是氟苯虫酰胺与载体蛋白通过酰胺键连接形成的偶联物。本发明提供的制备氟苯虫酰胺抗原的方法，能够方便、快捷地获得氟苯虫酰胺抗原，且合成步骤简洁明了、合成成本低，效果好。用本发明方法制备的氟苯虫酰胺抗原进行免疫得到的抗体的特异性好、最低检测限值低。本发明的制备氟苯虫酰胺抗原的方法及由该方法获得的氟苯虫酰胺抗原在氟苯虫酰胺的快速免疫检测应用中有广阔的前景。

公开(公告)号：CN104774145B

公开(公告)日：2017-03-15

申请号：CN201510145690.4

申请日：2015-03-30

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 段留生 ,  高飞 ,  李召虎 ,  谭伟明 ,  田晓莉 ,  杜明伟 ,  张明才 ,  王保民

IPC: C07C59/90 ,  C07C51/50 ,  A01N37/42 ,  A01N25/22 ,  A01P21/00

Abstract: 本发明提供一种稳定脱落酸及其盐的方法。所述方法为向脱落酸及其盐中加入木质素磺酸盐。通过：a)将脱落酸及其盐与木质素磺酸盐混合制成制剂；其中木质素磺酸盐的加入量为：当所述制剂被兑水稀释到脱落酸的目标施加浓度值时，所述木质素磺酸盐的浓度为50mg/L～5000mg/L；b)在施用时，将脱落酸及其盐制剂兑水稀释到脱落酸的目标施加浓度值得到稀释液，根据所述稀释液的体积，加入木质素磺酸盐，使得所述稀释液中的木质素磺酸盐的浓度为50mg/L～5000mg/L。木质素磺酸盐在环境中可完全生物降解、无毒，在目标浓度下其抗紫外及抗氧化性很好，能同时作为紫外吸收剂、抗氧化剂及分散剂使用，价格极其低廉，能显著减少脱落酸生产和使用成本。

公开(公告)号：CN104569416A

公开(公告)日：2015-04-29

申请号：CN201510032949.4

申请日：2015-01-22

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 周立刚 ,  王保民 ,  傅小香 ,  王晓晗 ,  赖道万 ,  孙伟波 ,  王阿利

IPC: G01N33/577 ,  G01N30/89

CPC classification number: G01N33/577 ,  G01N30/89

Abstract: 本发明公开了一种检测稻曲菌素B的方法及其专用酶联免疫试剂盒。该方法及试剂盒所使用的抗稻曲菌素B的单克隆抗体是由杂交瘤细胞系1B5A10分泌产生的，该杂交瘤细胞株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.10113。本发明所提供单克隆抗体是以稻曲菌素B-BSA溶液为包被抗原，通过间接竞争ELISA方法对杂交瘤细胞进行筛选得到的，特异性强，与稻曲菌素A的交叉反应率为13.91％；利用该单克隆抗体制备得到的间接竞争酶联免疫试剂盒，用于定性或定量检测样品中稻曲菌素B，线性检测范围在2.49ng/mL–107.35ng/mL，具有快速、灵敏的优点。

公开(公告)号：CN103194460B

公开(公告)日：2015-04-08

申请号：CN201310133843.4

申请日：2013-04-17

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  张亮 ,  郭素琴 ,  谭桂玉 ,  曹振 ,  何丽珊 ,  张瑞 ,  张威

IPC: C12N15/32 ,  C12N15/63 ,  C12N5/10 ,  C12N1/21 ,  C07K14/325 ,  A01N47/44 ,  A01P7/04 ,  C12N15/70 ,  C12R1/07

Abstract: 本发明公开了一种苏云金芽孢杆菌晶体融合蛋白的制备方法。该方法涉及一种经过密码子优化的苏云金芽孢杆菌晶体蛋白Bt Cry3Bb的基因，具体如序列表中序列1所示。本发明所提供的苏云金芽孢杆菌晶体融合蛋白的制备方法，包括如下步骤：1）将含有序列1的第109-2064位或整个序列1所示DNA片段的重组载体导入大肠杆菌，得到重组大肠杆菌；2）培养所述重组大肠杆菌，进行诱导表达，收集并裂解菌体，获得苏云金芽孢杆菌晶体融合蛋白Bt Cry3Bb（序列2）。在大肠杆菌中，本发明所提供的经过密码子优化的苏云金芽孢杆菌晶体蛋白Bt Cry3Bb基因（N-Cry3Bb基因）表达所得蛋白并未因密码子优化而影响其蛋白活性。

公开(公告)号：CN103233020B

公开(公告)日：2014-12-10

申请号：CN201310122670.6

申请日：2013-04-10

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  张威 ,  谭桂玉 ,  曹振 ,  何丽珊 ,  郭素琴 ,  张亮 ,  张瑞

IPC: C12N15/32 ,  C12N15/62 ,  C07K19/00 ,  C12N15/63 ,  C12N5/10 ,  C12N1/21 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明公开了一种苏云金芽孢杆菌晶体蛋白Bt Cry34B的制备方法。该方法包括如下步骤：1）将SEQ ID №.1所示的DNA插入pET28a表达载体中，得到重组表达载体；2）将所述重组表达载体导入大肠杆菌BL21（DE3），得到重组菌；3）培养所述重组菌，并进行诱导表达，收集菌体；裂解菌体，即得。本发明应用基因工程方法在国内首次合成Bt Cry34B基因，并首次制备出了Bt Cry34B融合蛋白，为进一步探讨该蛋白的检测方法、生理功能及其作用机制、降解机制打下了基础。

公开(公告)号：CN103233021A

公开(公告)日：2013-08-07

申请号：CN201310133824.1

申请日：2013-04-17

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  曹振 ,  谭桂玉 ,  张亮 ,  张威 ,  郭素琴 ,  张瑞 ,  何丽珊

IPC: C12N15/32 ,  C12N15/62 ,  C12N15/63 ,  C12N5/10 ,  C12N1/15 ,  C12N1/21 ,  C12N1/19 ,  C12N15/70 ,  C07K14/325 ,  C07K19/00 ,  A01N57/16 ,  A01N63/02 ,  A61P7/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种苏云金芽孢杆菌晶体融合蛋白的制备方法。该方法涉及一种经过密码子优化的苏云金芽孢杆菌晶体蛋白Bt Cry35Ba2的基因，具体如序列表中序列1所示。本发明所提供的苏云金芽孢杆菌晶体融合蛋白的制备方法，包括如下步骤：1）将含有序列1的第109-1269位或整个序列1所示DNA片段的重组载体导入大肠杆菌，得到重组大肠杆菌；2）培养所述重组大肠杆菌，进行诱导表达，收集并裂解菌体，获得苏云金芽孢杆菌晶体融合蛋白Bt Cry35Ba2（序列2）。在大肠杆菌中，本发明所提供的经过密码子优化的苏云金芽孢杆菌晶体蛋白Bt Cry35Ba2基因（N-Cry35Ba2基因）表达所得蛋白并未因密码子优化而影响其蛋白活性。

公开(公告)号：CN101498728B

公开(公告)日：2013-07-31

申请号：CN200910079260.1

申请日：2009-03-05

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 李健强 ,  夏源源 ,  王保民 ,  曹永松 ,  刘西莉 ,  罗来鑫 ,  刘鹏飞

IPC: G01N33/577 ,  G01N30/02 ,  C07K16/44 ,  C07K14/765 ,  C07K14/77 ,  C12N5/20

Abstract: 本发明公开了一种检测邻烯丙基苯酚的试剂盒及其专用抗体。该试剂盒包括抗邻烯丙基苯酚的单克隆抗体或抗邻烯丙基苯酚的多克隆抗体。所述抗邻烯丙基苯酚的单克隆抗体是由保藏号为CGMCC No.2905的小鼠杂交瘤细胞系mAb225#分泌产生的。本发明的检测邻烯丙基苯酚的酶联免疫试剂盒及检测邻烯丙基苯酚的方法，可用于检测农产品(如植物组织)中邻烯丙基苯酚的残留量，具有样品前处理过程简单、操作简便、费用低廉、特异性好、灵敏度高、精确度强等特点，能够现场监控且适合大量样本的筛查。因此本发明检测方法及其专用试剂盒将在农作物产品中邻烯丙基苯酚药物的残留检测中发挥重要作用。

公开(公告)号：CN103194460A

公开(公告)日：2013-07-10

申请号：CN201310133843.4

申请日：2013-04-17

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  张亮 ,  郭素琴 ,  谭桂玉 ,  曹振 ,  何丽珊 ,  张瑞 ,  张威

IPC: C12N15/32 ,  C12N15/63 ,  C12N5/10 ,  C12N1/21 ,  C07K14/325 ,  A01N47/44 ,  A01P7/04 ,  C12N15/70 ,  C12R1/07

Abstract: 本发明公开了一种苏云金芽孢杆菌晶体融合蛋白的制备方法。该方法涉及一种经过密码子优化的苏云金芽孢杆菌晶体蛋白Bt Cry3Bb的基因，具体如序列表中序列1所示。本发明所提供的苏云金芽孢杆菌晶体融合蛋白的制备方法，包括如下步骤：1）将含有序列1的第109-2064位或整个序列1所示DNA片段的重组载体导入大肠杆菌，得到重组大肠杆菌；2）培养所述重组大肠杆菌，进行诱导表达，收集并裂解菌体，获得苏云金芽孢杆菌晶体融合蛋白Bt Cry3Bb（序列2）。在大肠杆菌中，本发明所提供的经过密码子优化的苏云金芽孢杆菌晶体蛋白Bt Cry3Bb基因（N-Cry3Bb基因）表达所得蛋白并未因密码子优化而影响其蛋白活性。

公开(公告)号：CN103145815A

公开(公告)日：2013-06-12

申请号：CN201310070417.0

申请日：2013-03-06

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  张亮 ,  曹振 ,  郭素琴 ,  谭桂玉 ,  南铁贵 ,  李召虎

IPC: C07K14/325 ,  C07K1/36 ,  C07K1/34 ,  C07K1/30 ,  C07K1/22

Abstract: 本发明公开了一种从抗虫棉种子中纯化Bt毒蛋白的方法。本发明提供的从抗虫棉种子中纯化Bt Cry1Ac蛋白的方法，包括如下步骤：（1）将抗虫棉种子去壳后进行可溶性总蛋白的提取，得到溶液甲；（2）将所述溶液甲进行60%饱和度的硫酸铵沉淀，离心收集沉淀；（3）溶解步骤（2）得到的沉淀并进行透析，得到溶液乙；（4）将所述溶液乙进行免疫亲和层析，收集与抗Bt Cry1Ab/Ac蛋白的单克隆抗体特异结合的蛋白组分，即为Bt毒蛋白；所述抗Bt Cry1Ab/Ac蛋白的单克隆抗体为是由杂交瘤Bt2F9 CGMCC No.5162分泌产生的单克隆抗体。本发明具有以下优点：（1）简化了纯化流程，降低了纯化成本；（2）缩短了纯化时间，减少了目的蛋白损失。

公开(公告)号：CN101914152B

公开(公告)日：2012-11-14

申请号：CN201010259922.6

申请日：2010-08-20

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王保民 ,  南铁贵 ,  赵洪伟 ,  谭桂玉 ,  高巍 ,  谭伟明 ,  李召虎

IPC: C07K14/765 ,  C07K14/77 ,  C07K16/44 ,  G01N33/53

Abstract: 本发明公开了一种汞离子抗原及其制备方法与应用。本发明提供的方法包括如下步骤：1)活化4-巯基苯基乙酸，得到活化的4-巯基苯基乙酸；2)将步骤1)得到的活化的4-巯基苯基乙酸与载体蛋白偶联，得到活化的4-巯基苯基乙酸与载体蛋白的偶联物；3)将步骤2)得到的所述活化的4-巯基苯基乙酸与载体蛋白的偶联物与汞离子螯合，得到所述偶联物和汞离子的螯合物，即得到汞离子抗原。本发明的制备汞离子抗原的方法能够方便、快捷地获得汞离子抗原，且合成步骤简洁明了、合成成本低，效果好。