谷斑皮蠹和花斑皮蠹RPA-CRISPR/Cas12a可视化检测鉴定方法及其应用

    公开(公告)号:CN118581225A

    公开(公告)日:2024-09-03

    申请号:CN202310197800.6

    申请日:2023-03-03

    Inventor: 李志红 曾令瑜

    Abstract: 本发明公开了谷斑皮蠹和花斑皮蠹RPA‑CRISPR/Cas12a可视化检测鉴定方法及其应用。本发明还公开了用于鉴定谷斑皮蠹和花斑皮蠹的引物组,其包括引物对TgF1/TgR1和TvF2/TvR2。进一步的,该引物组还包括引物对TgF1/TgR1对应的Tg‑crRNA1和引物对TvF2/TvR2对应的Tv‑crRNA1。本发明引物组可用于鉴定谷斑皮蠹和/或花斑皮蠹,以及区分谷斑皮蠹(或花斑皮蠹)与其形态相似种。本发明采用RPA‑CRISPR/Cas12a可视化快速检测方法鉴定谷斑皮蠹和花斑皮蠹,具有快速、灵敏、特异、便携等优点,能够不受皮蠹样品发育状态和环境条件的影响,实现现场快速、准确检测。

    一种用于鉴定地中海实蝇的LAMP试剂盒及其应用

    公开(公告)号:CN114058707A

    公开(公告)日:2022-02-18

    申请号:CN202010742794.4

    申请日:2020-07-29

    Inventor: 李志红 张岳

    Abstract: 本发明公开了一种用于鉴定地中海实蝇的LAMP试剂盒及其应用。所述LAMP试剂盒含有LAMP引物组,所述LAMP引物组由引物1‑引物4组成;所述引物1为序列表中序列1所示的单链DNA分子;所述引物2为序列表中序列2所示的单链DNA分子;所述引物3为序列表中序列3所示的单链DNA分子;所述引物4为序列表中序列4所示的单链DNA分子。本发明的LAMP试剂盒特异性好、检测时间短,对不同种群的地中海实蝇均能有效检测,且检测方法具有不依赖贵重仪器、准确、快速、适用范围广等优点,不仅对地中海实蝇快速检测具有指导意义,也为地中海实蝇快速检测提供了有力的工具。

    一种用于鉴定或辅助鉴定仓储书虱的方法及其专用成套试剂

    公开(公告)号:CN105567840B

    公开(公告)日:2019-03-26

    申请号:CN201610076910.7

    申请日:2016-02-03

    Inventor: 李志红 庞奥涵

    Abstract: 本发明公开了一种用于鉴定或辅助鉴定仓储书虱的方法及其专用成套试剂。本发明提供的用于鉴定或辅助鉴定仓储书虱的成套试剂,包括由探针Lbr、探针Len、探针Lde、探针Lpe、探针Lru、探针Lme、探针Lbo、探针Lco、探针Lpa和探针Ltr组成的成套探针,核苷酸序列依次为序列表中的序列1、序列2、序列3、序列4、序列5、序列6、序列7、序列8、序列9和序列10。实验证明,利用本发明提供的用于鉴定或辅助鉴定仓储书虱的方法及其专用成套试剂,可以快速实现对10种仓储书虱种类的鉴定,并且特异性好、通量高、成分低、操作简单,准确率达到100%,为仓储保护部门和检验检疫部门提供了快速鉴定仓储书虱的工具和技术,可有效保护农业生产和生态安全,促进我国经济贸易发展。

    翅发育相关基因optomotor-blind的dsRNA及其在害虫防治中的应用

    公开(公告)号:CN108949762A

    公开(公告)日:2018-12-07

    申请号:CN201810870037.8

    申请日:2018-08-02

    CPC classification number: C12N15/113 A01N57/16 C12N2310/14

    Abstract: 本发明公开了翅发育相关基因optomotor blind的dsRNA及其在害虫防治中的应用。本发明首次对橘小实蝇翅发育基因optomotor blind设计引物并合成了dsRNA,且运用饲喂法对橘小实蝇optomotor blind基因进行RNAi,在保证干扰效率的前提下得到翅发育畸形的表型。本发明不仅解决了注射导入dsRNA在田间难以操作的问题,为今后研究直接喷施的RNA制剂来防控橘小实蝇打下基础,也对有效防控橘小实蝇的入侵和扩散,保护我国农业生产、生态安全以及人类健康具有良好的经济、社会效益。

    一组用于鉴定拟谷盗类储粮害虫的引物及其应用

    公开(公告)号:CN104164431B

    公开(公告)日:2017-01-04

    申请号:CN201410423201.2

    申请日:2014-08-26

    Inventor: 李志红 王一椒

    Abstract: 本发明公开了一组用于鉴定拟谷盗类储粮害虫的引物及其应用。本发明公开一组引物,为如下所示的引物对中的至少一种:(1)SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的DNA分子组成的引物对;(2)SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示的DNA分子组成的引物对;(3)SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示的DNA分子组成的引物对。采用本发明的引物对检测6种常见拟谷盗类储粮害虫的方法,与传统形态鉴定方法相比,该方法不需要形态分类学基础且实现了对非成虫态的鉴定,而与其它分子生物学鉴定方法相比,该方法简化了鉴定拟谷盗类储粮害虫的分子检测步骤,具有操作简便、耗时较短、灵敏度高且较稳定,结果直观等特点,为进一步鉴定拟谷盗属近缘种的研究奠定了基础。

    一种用于鉴定或辅助鉴定仓储书虱的方法及其专用成套试剂

    公开(公告)号:CN105567840A

    公开(公告)日:2016-05-11

    申请号:CN201610076910.7

    申请日:2016-02-03

    Inventor: 李志红 庞奥涵

    CPC classification number: C12Q1/6888 C12Q2600/158 C40B40/06

    Abstract: 本发明公开了一种用于鉴定或辅助鉴定仓储书虱的方法及其专用成套试剂。本发明提供的用于鉴定或辅助鉴定仓储书虱的成套试剂,包括由探针Lbr、探针Len、探针Lde、探针Lpe、探针Lru、探针Lme、探针Lbo、探针Lco、探针Lpa和探针Ltr组成的成套探针,核苷酸序列依次为序列表中的序列1、序列2、序列3、序列4、序列5、序列6、序列7、序列8、序列9和序列10。实验证明,利用本发明提供的用于鉴定或辅助鉴定仓储书虱的方法及其专用成套试剂,可以快速实现对10种仓储书虱种类的鉴定,并且特异性好、通量高、成分低、操作简单,准确率达到100%,为仓储保护部门和检验检疫部门提供了快速鉴定仓储书虱的工具和技术,可有效保护农业生产和生态安全,促进我国经济贸易发展。

    用于鉴定六种拟谷盗类储粮害虫的实时荧光PCR检测试剂盒

    公开(公告)号:CN104894117A

    公开(公告)日:2015-09-09

    申请号:CN201510280781.9

    申请日:2015-05-28

    Inventor: 李志红 王一椒

    Abstract: 本发明公开了一种用于鉴定六种拟谷盗类储粮害虫的实时荧光PCR检测试剂盒。本发明提供的试剂盒,包括Tca引物探针组合物、Tco引物探针组合物、Tde引物探针组合物、Tma引物探针组合物、Tfr引物探针组合物和Tbr引物探针组合物。本发明还保护所述试剂盒在鉴定待测拟谷盗是否为赤拟谷盗、杂拟谷盗、褐拟谷盗、黑拟谷盗、弗氏拟谷盗或短角拟谷盗中的应用。本发明能够满足储粮保护和口岸检疫部门对拟谷盗类储粮害虫快速、准确鉴定方法和技术的迫切需求,为储粮害虫的防治和检验检疫提供技术支持和决策参考,从而有效降低因拟谷盗类储粮害虫滋生、为害和扩散造成的农业经济损失,具有重要的推广应用价值。

    一种基于特异引物鉴定仓储书虱的试剂盒

    公开(公告)号:CN103305616A

    公开(公告)日:2013-09-18

    申请号:CN201310250516.7

    申请日:2013-06-21

    Inventor: 李志红 崔冰艺

    Abstract: 本发明公开了一种用于鉴定或辅助鉴定仓储书虱的试剂盒。本发明所提供的试剂盒包括如下10个引物对中的至少一对:引物对1(序列1和序列2)、引物对2(序列3和序列4)、引物对3(序列5和序列6)、引物对4(序列7和序列8)、引物对5(序列9和序列10)、引物对6(序列11和序列12)、引物对7(序列13和序列14)、引物对8(序列15和序列16)、引物对9(序列17和序列18)、引物对10(序列19和序列20)。实验证明,利用本发明所提供的基于特异引物鉴定仓储书虱的试剂盒鉴别世界10种仓储书虱,特异性强、操作简单且可重复性、强灵敏度高且较稳定,是鉴别书虱的理想方法。

    黄瓜细菌性角斑病菌检测用引物

    公开(公告)号:CN102181522A

    公开(公告)日:2011-09-14

    申请号:CN201110053822.2

    申请日:2011-03-07

    Abstract: 本发明提供了一种黄瓜细菌性角斑病菌检测用引物,所述引物的核苷酸序列如序列表PSL-F&PSL-R所示。本发明还进一步提供了检测黄瓜细菌性角斑病菌的方法,该方法以样品菌液或者植物提取DNA为模板,利用上述引物进行PCR扩增,扩增结束后用凝胶电泳可检测到179bp的扩增片段。本发明引物特异性好,灵敏度高,为黄瓜种子进出口安全提供了保证。

    一种基于RPA-CRISPR/Cas12a的无色书虱可视化检测鉴定方法及其应用

    公开(公告)号:CN119614718A

    公开(公告)日:2025-03-14

    申请号:CN202411948706.0

    申请日:2024-12-27

    Abstract: 本发明公开了一种基于RPA‑CRISPR/Cas12a的无色书虱可视化检测鉴定方法及其应用。本发明提供了一对能够在恒温条件下实现无色书虱核酸快速扩增的RPA引物对和特异性识别无色书虱靶标区域的crRNA序列,同时还建立了基于RPA‑CRISPR/Cas12a的无色书虱可视化检测鉴定方法。本发明基于RPA‑CRISPR/Cas12a建立的无色书虱可视化检测鉴定方法具有快速、高效、特异性强、灵敏度高、操作简便、无需特殊仪器的优点,且成本低、适用于现场检测、易于在基层推广,不仅能够为无色书虱的防控提供可靠技术依据,还对储粮保护、外来生物入侵防控及国际贸易具有重要意义。

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