公开(公告)号：CN118773137A

公开(公告)日：2024-10-15

申请号：CN202410844129.4

申请日：2024-06-27

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 石文标 ,  张冰艳 ,  陈璐 ,  肖维汉 ,  安杰 ,  罗永挺 ,  李凯风 ,  罗洁 ,  高钧照 ,  杨坤 ,  耿源

IPC: C12N5/09 ,  C12N5/071 ,  C12Q1/02

Abstract: 本发明属于生物工程技术，公开了一种基于人源肝细胞系HepG2的维生素B3缺乏模型制备方法和应用；所述方法包含以下步骤：(1)复苏HepG2细胞，并用DMEM培养基(含血清)培养；(2)细胞密度长到80％左右进行传代，使用DMEM培养基(含血清)连续三次传代；(3)换维生素B3缺乏培养基(含血清)连续进行三次传代，制作缺乏维生素B3的HepG2模型。本发明对DMEM细胞培养基(无血清)的成分进行了调整，通过该定制培养基对HepG2细胞进行传代培养使其达到维生素B3缺乏状态，细胞增殖速率在细胞培养第3天时显著提高，模型构建成功率可达95％以上。本发明采用优化细胞培养基和细胞培养方案的手段，可使HepG2细胞充分表现出因维生素B3摄入不足而导致其缺乏的生理状态，并可采用维生素B3缺乏培养基传代培养细胞使其继续维持维生素B3缺乏生理状态，可作为永生化细胞的基础生理模型满足不同的实验需求，具有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN118562722A

公开(公告)日：2024-08-30

申请号：CN202410844107.8

申请日：2024-06-27

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 石文标 ,  张冰艳 ,  肖维汉 ,  陈璐 ,  罗洁 ,  安杰 ,  罗永挺 ,  李凯风 ,  高钧照 ,  耿源 ,  陈宇

IPC: C12N5/071 ,  C12Q1/02

Abstract: 本发明属于生物工程技术，公开了一种基于肝原代细胞的维生素B3缺乏模型制备方法和应用；所述方法包含以下步骤：(1)提取肝原代细胞，并将肝原代细胞用DMEM培养基(含血清)种植到培养皿上，种植密度为5×105/mL，种植后5‑6小时左右，换DMEM培养基(含血清)；(2)次日换培养基，肝细胞缺乏模型构建组换有维生素B3缺乏培养基(无血清)；(3)第三日，肝细胞缺乏模型构建组换维生素B3缺乏培养基(无血清)；(4)第四日，肝细胞缺乏模型构建组换维生素B3缺乏培养基(无血清)，持续培养。本发明模型构建成功率可达95％以上。本发明采用优化细胞培养基和细胞培养方案的手段，可使肝原代细胞充分表现出因维生素B3摄入不足而导致其缺乏的生理状态，可作为原代细胞的基础生理模型满足不同的实验需求，具有广泛的应用前景。