伪狂犬病病毒双荧光标记5基因缺失株的构建

    公开(公告)号:CN105385666B

    公开(公告)日:2019-01-25

    申请号:CN201510837152.1

    申请日:2015-11-26

    Abstract: 本发明涉及一种伪狂犬病病毒双荧光标记5基因缺失株的构建。该病毒株是以自行分离的一株伪狂犬病病毒(SX株)为母本,通过分子生物学手段,缺失伪狂犬病病毒的gE基因、gI基因、US9基因、UL49.5部分基因和TK基因,并以绿色荧光蛋白(GFP)和红色荧光蛋白(RFP)作为标记蛋白代替缺失的基因,获得双荧光标记的5基因缺失病毒株(rPRV/gE‑/gI‑/US9‑/△UL49.5/TK‑/GFP+/RFP+)。本发明建立了一套伪狂犬活病毒载体系统;双荧光蛋白标记便于今后基因工程操作的筛选和鉴定;可同时插入多种外源基因,较一般活载体系统更加高效。该双荧光标记缺失病毒作为活载体的成功构建,为研制重组伪狂犬病基因工程疫苗奠定了基础。

    BHK-21细胞全悬浮培养技术在新城疫疫苗生产中的应用

    公开(公告)号:CN104258385A

    公开(公告)日:2015-01-07

    申请号:CN201410277713.2

    申请日:2014-11-03

    Abstract: 本发明涉及BHK-21细胞全悬浮培养技术在新城疫疫苗生产中的应用。本发明公开的BHK-21细胞全悬浮培养生产新城疫疫苗的工艺包括以下步骤:(1)病毒株选育:鸡胚培养的新城疫疫苗种毒接种单层BHK-21细胞,加入病毒维持液培养,得到适应BHK-21细胞的新城疫疫苗毒,并进行系统鉴定;(2)悬浮细胞株的驯化与选育:适合新城疫病毒培养用全悬浮BHK21细胞的驯化和基础种子的建立;(3)悬浮细胞扩大培养;(4)接毒和收毒:适应BHK-21细胞的新城疫疫苗毒接种及其毒液收获;(5)增殖新城疫疫苗毒的毒价测定与配苗。本发明使得新城疫疫苗实现了由鸡胚向哺乳动物细胞大规模培养生产的转变,这不仅简化了新城疫疫苗的生产工艺,降低生产成本,还大大提高疫苗的产量和质量。

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