公开(公告)号：CN113549591A

公开(公告)日：2021-10-26

申请号：CN202110911066.6

申请日：2021-08-10

Applicant: 中南林业科技大学

Inventor： 肖诗鑫 ,  李素芳 ,  叶天文

IPC: C12N5/04

Abstract: 本发明公开了一种油茶叶肉原生质体分离与纯化方法，属于植物生物技术领域。本发明方法包括以下步骤：对油茶组培苗进行22～32h黑暗预处理，采集组培苗完全展开的叶片；去掉采集叶片的主脉和叶缘，切成叶条加入到含EME培养基的无菌瓶中，盖上封瓶膜，负压下抽真空10min～1h；吸出EME培养基、加入酶液；无菌瓶用封口膜封口后酶解6～14h；将酶解后的溶液通过无菌筛过滤，滤液离心后去上清，用W缓冲液对原生质体进行清洗和重悬，冰上静置沉淀后，吸去上清，得到纯净的原生质体。通过本发明方法获得的原生质体形态完整、稳定，产量高达2.8×107个/g·FW，原生质体活力高达91.7％以上。

公开(公告)号：CN111705033B

公开(公告)日：2022-04-01

申请号：CN202010651889.5

申请日：2020-07-08

Applicant: 中南林业科技大学

Inventor： 肖诗鑫 ,  叶天文 ,  李素芳 ,  徐新

IPC: C12N5/04 ,  C12N5/02

Abstract: 本发明公开了一种油茶愈伤悬浮培养及原生质体分离的方法，属于植物组织培养领域。本发明油茶愈伤悬浮培养的方法，以材料数量巨大的茎段作为外植体，将诱导得到的致密愈伤组织在含NAA、2,4‑D、6‑BA的培养基上继代培养得到了容易建立悬浮细胞系的疏松颗粒状愈伤组织；该方法解决了现有技术诱导的油茶茎段愈伤组织较为致密、不适合进行悬浮细胞培养的问题。本发明油茶原生质体分离的方法，将油茶愈伤原生质体悬浮于密度较大的蔗糖溶液中，通过离心使密度较大的碎片等杂质下沉、油茶原生质体上浮，从而实现其分离纯化；该方法解决了油茶愈伤原生质体无法通过离心收集纯化的问题，其纯化效率高，获得的原生质体清晰可见、纯度高。

公开(公告)号：CN113549591B

公开(公告)日：2024-04-26

申请号：CN202110911066.6

申请日：2021-08-10

Applicant: 中南林业科技大学

Inventor： 肖诗鑫 ,  李素芳 ,  叶天文

IPC: C12N5/04

Abstract: 本发明公开了一种油茶叶肉原生质体分离与纯化方法，属于植物生物技术领域。本发明方法包括以下步骤：对油茶组培苗进行22～32h黑暗预处理，采集组培苗完全展开的叶片；去掉采集叶片的主脉和叶缘，切成叶条加入到含EME培养基的无菌瓶中，盖上封瓶膜，负压下抽真空10min～1h；吸出EME培养基、加入酶液；无菌瓶用封口膜封口后酶解6～14h；将酶解后的溶液通过无菌筛过滤，滤液离心后去上清，用W缓冲液对原生质体进行清洗和重悬，冰上静置沉淀后，吸去上清，得到纯净的原生质体。通过本发明方法获得的原生质体形态完整、稳定，产量高达2.8×107个/g·FW，原生质体活力高达91.7％以上。

公开(公告)号：CN111705033A

公开(公告)日：2020-09-25

申请号：CN202010651889.5

申请日：2020-07-08

Applicant: 中南林业科技大学

Inventor： 肖诗鑫 ,  叶天文 ,  李素芳 ,  徐新

IPC: C12N5/04 ,  C12N5/02

Abstract: 本发明公开了一种油茶愈伤悬浮培养及原生质体分离的方法，属于植物组织培养领域。本发明油茶愈伤悬浮培养的方法，以材料数量巨大的茎段作为外植体，将诱导得到的致密愈伤组织在含NAA、2,4-D、6-BA的培养基上继代培养得到了容易建立悬浮细胞系的疏松颗粒状愈伤组织；该方法解决了现有技术诱导的油茶茎段愈伤组织较为致密、不适合进行悬浮细胞培养的问题。本发明油茶原生质体分离的方法，将油茶愈伤原生质体悬浮于密度较大的蔗糖溶液中，通过离心使密度较大的碎片等杂质下沉、油茶原生质体上浮，从而实现其分离纯化；该方法解决了油茶愈伤原生质体无法通过离心收集纯化的问题，其纯化效率高，获得的原生质体清晰可见、纯度高。