公开(公告)号：CN109400695B

公开(公告)日：2020-06-30

申请号：CN201811283889.3

申请日：2018-10-31

Applicant: 中南大学湘雅医院

Inventor： 陈永恒 ,  周展 ,  陈主初 ,  李俊

IPC: C07K14/605 ,  C07K1/107 ,  A61K38/26 ,  A61K47/60 ,  A61P25/28 ,  A61P3/04 ,  A61P3/10

Abstract: 本发明提供了一种多肽的修饰方法及应用，所述方法包括以下步骤：(1)向多肽的N端引入X，获得X‑多肽；(2)将所述X氧化为醛基；(3)加入还原剂，将步骤(2)获得的氧化产物与PEG进行共价偶联，得到PEG修饰的多肽；其中，所述X为苏氨酸或丝氨酸。本发明向多肽的N端引入一个苏氨酸或一个丝氨酸，并采用高度特异性的氧化方法将多肽N端的临位氨基醇结构衍生为醛基，与PEG共价偶联后得到成分单一的PEG修饰多肽，方法通用性强，应用范围广，修饰后的多肽分离方法简便，提高了多肽的稳定性和循环半衰期。

公开(公告)号：CN104232653B

公开(公告)日：2017-04-05

申请号：CN201410481647.0

申请日：2014-09-19

Applicant: 中南大学湘雅医院

Inventor： 徐江 ,  陈永恒 ,  陈主初 ,  陈林 ,  李柱一 ,  徐志凯 ,  吴兴安 ,  李佳 ,  李俊

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/70 ,  C07K14/435

Abstract: 本发明公开了一种重组α‑银环蛇毒素αBtx的制备方法，所述方法包括如下步骤：(1)优化重组α‑银环蛇毒素(αBtx)的编码序列，优化后的编码序列如SEQ ID NO.15所示；(2)以SEQ ID NO.15所示编码序列为基础，构建重组α‑银环蛇毒素(rαBtx)的表达载体；(3)将表达载体转化大肠杆菌，构建αBtx重组表达工程菌，培养rαBtx重组表达工程菌后，以IPTG诱导rαBtx表达。

公开(公告)号：CN104630251A

公开(公告)日：2015-05-20

申请号：CN201510050370.0

申请日：2015-01-30

Applicant: 中南大学湘雅医院

Inventor： 李俊 ,  徐江 ,  陈永恒 ,  陈林 ,  闫宁宁 ,  陈主初

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/12 ,  C07K14/46

Abstract: 本发明公开了一种重组珊瑚蛇毒素蛋白MitTx的制备方法。所述方法包括：1)优化MitTxα及MitTxβ基因序列；2)重组MitTxα及MitTxβ蛋白的表达与复性；3)MitTxα复性后溶液的阳离子交换纯化；4)MitTxβ复性后的阴离子交换纯化；5)将步骤3流穿产物的阳离子交换纯化；6)步骤2和4产物的结合实验。本发明可以得到MitTx蛋白纯品，可用于大规模生产和纯化，节约了纯化成本提高纯化效率。

公开(公告)号：CN104372008B

公开(公告)日：2018-02-23

申请号：CN201410481648.5

申请日：2014-09-19

Applicant: 中南大学湘雅医院

Inventor： 徐江 ,  陈永恒 ,  陈主初 ,  陈林 ,  李柱一 ,  徐志凯 ,  吴兴安 ,  李佳 ,  李俊

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明公开了一种重组α‑银环蛇毒素αBtx的编码序列及表达载体，所述编码序列如SEQ ID NO.1—14所示。

公开(公告)号：CN104372008A

公开(公告)日：2015-02-25

申请号：CN201410481648.5

申请日：2014-09-19

Applicant: 中南大学湘雅医院

Inventor： 徐江 ,  陈永恒 ,  陈主初 ,  陈林 ,  李柱一 ,  徐志凯 ,  吴兴安 ,  李佳 ,  李俊

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明公开了一种重组α-银环蛇毒素αBtx的编码序列及表达载体，所述编码序列如SEQ ID NO.1—14所示。

公开(公告)号：CN104232653A

公开(公告)日：2014-12-24

申请号：CN201410481647.0

申请日：2014-09-19

Applicant: 中南大学湘雅医院

Inventor： 徐江 ,  陈永恒 ,  陈主初 ,  陈林 ,  李柱一 ,  徐志凯 ,  吴兴安 ,  李佳 ,  李俊

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/70 ,  C07K14/435

Abstract: 本发明公开了一种重组α-银环蛇毒素αBtx的制备方法，所述方法包括如下步骤：(1)优化重组α-银环蛇毒素(αBtx)的编码序列，优化后的编码序列如SEQ ID NO.15所示；(2)以SEQ ID NO.15所示编码序列为基础，构建重组α-银环蛇毒素(rαBtx)的表达载体；(3)将表达载体转化大肠杆菌，构建αBtx重组表达工程菌，培养rαBtx重组表达工程菌后，以IPTG诱导rαBtx表达。

公开(公告)号：CN109400695A

公开(公告)日：2019-03-01

申请号：CN201811283889.3

申请日：2018-10-31

Applicant: 中南大学湘雅医院

Inventor： 陈永恒 ,  周展 ,  陈主初 ,  李俊

IPC: C07K14/605 ,  C07K1/107 ,  A61K38/26 ,  A61K47/60 ,  A61P25/28 ,  A61P3/04 ,  A61P3/10

Abstract: 本发明提供了一种多肽的修饰方法及应用，所述方法包括以下步骤：(1)向多肽的N端引入X，获得X-多肽；(2)将所述X氧化为醛基；(3)加入还原剂，将步骤(2)获得的氧化产物与PEG进行共价偶联，得到PEG修饰的多肽；其中，所述X为苏氨酸或丝氨酸。本发明向多肽的N端引入一个苏氨酸或一个丝氨酸，并采用高度特异性的氧化方法将多肽N端的临位氨基醇结构衍生为醛基，与PEG共价偶联后得到成分单一的PEG修饰多肽，方法通用性强，应用范围广，修饰后的多肽分离方法简便，提高了多肽的稳定性和循环半衰期。