公开(公告)号：CN111304088A

公开(公告)日：2020-06-19

申请号：CN202010113468.7

申请日：2020-02-24

Applicant: 中南大学

Inventor： 吴翔 ,  马振荣 ,  蒋若兰 ,  严康 ,  管洁 ,  舒衡平

IPC: C12N1/11 ,  C12N15/85 ,  C12N15/66 ,  C12Q1/04 ,  A61K39/002 ,  A61P33/02 ,  C12R1/90

Abstract: 本发明公开了一种弓形虫wx2基因缺失株、构建方法及用途，运用CRISPR/Cas9技术，将弓形虫RH株的wx2基因进行敲除，成功获得具有乙胺嘧啶药物抗性的wx2基因缺失株。具体方法是通过构建CRISPR质粒pSAG1-Cas9-U6-sgwx2和药物抗性片段wx2-DHFR，利用CRISPR质粒的靶向剪切和药物抗性片段的同源重组，经药物筛选单克隆和单克隆缺失株的鉴定，成功获得弓形虫RH株的wx2基因缺失株。本发明为弓形虫生长的分子机制的研究夯实基础，为弓形虫疫苗的研制和弓形虫药物靶标分子的研究提供了理论基础。