云南地不容、千金藤和金线吊乌龟去甲乌药碱合酶筛选鉴定及应用

    公开(公告)号:CN116804203A

    公开(公告)日:2023-09-26

    申请号:CN202211374253.6

    申请日:2022-11-04

    Abstract: 本发明涉及了防己科三个千金藤属物种云南地不容(Stephania yunnanensis)、千金藤(Stephania japonica)和金线吊乌龟(Stephania cephalantha)中缩合多巴胺和4羟基苯乙醛(4‑HPAA)生成去甲乌药碱的5个去甲乌药碱合酶NCSs(SyNCS4、SyNCS5、SjNCS2、SjNCS4和ScNCS1)及其编码基因与功能。属于基因工程技术领域。本发明公开了三个千金藤属物种5个NCS基因的开放阅读框序列以及其编码的氨基酸序列。本发明基于三个千金藤属物种基因组和转录组数据筛选候选NCS基因,通过构建pET28a‑NCSs原核表达载体,以多巴胺和4‑HPAA为底物在体外验证三个千金藤属物种NCS基因的功能。结果证明SyNCS4、SyNCS5、SjNCS2、SjNCS4和ScNCS1具有缩合多巴胺和4‑HPAA生成去甲乌药碱的功能,为具有重要药用价值的苄基异喹啉类生物碱BIAs的合成生物学研究奠定基础。

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