一种梅山猪气喘病间接ELISA检测方法

    公开(公告)号:CN115433737A

    公开(公告)日:2022-12-06

    申请号:CN202211014971.2

    申请日:2022-08-23

    Abstract: 本发明公开了一种梅山猪气喘病间接ELISA检测方法,包括以下实施步骤:T1:构建重组表达质粒PET‑32a‑N1N2,以PRRSV NSP2基因组为模板,针对N1、N2基因序列设计特异性引物,通过PCR扩增得到目的片段,构建克隆质粒pMD‑18T‑N1N2,对克隆载体和原核表达载体pET‑32a同时进行双酶切,连接后得到重组表达质粒pET‑32a‑N1N2;T2:对目的蛋白进行表达及纯化,将构建重组表达质粒PET‑32a‑N1N2转入E.coliBL21(DE3),诱导表达融合蛋白,利用His柱层析进行纯化,得到经SDS‑PAGE电泳分析纯度较高的蛋白,利用RT‑PCR和蛋白原核表达技术获得纯度较高且具有良好特异性和免疫原性的融合蛋白PET‑32a‑N1N2,以融合蛋白PET‑32a‑N1N2为包被抗原,建立检测蓝耳病血清抗体的间接ELISA方法。

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