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公开(公告)号：CN114277109A
公开(公告)日：2022-04-05
申请号：CN202111228116.7
申请日：2021-10-21
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明提供了一种基于常温原核Argonaute蛋白的核酸检测方法及其应用。具体地，本发明提供了一种用于检测靶标核酸分子的检测体系，该体系包含(a)向导ssDNA对；(b)常温Argonaute蛋白(Ago酶)，所述常温Argonaute蛋白(Ago酶)为以DNA为向导指导剪切靶标DNA的常温Argonaute蛋白(Ago酶)；(c)荧光报告核酸，所述荧光报告核酸带有荧光基团和淬灭基团；其中，所述的靶标核酸分子为目标RNA。本发明的方法简便、兼容性好，可以广泛应用于感染性疾病如重大传染性和病原体感染性疾病(病毒、病原菌)检测领域等领域。
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公开(公告)号：CN111926117A
公开(公告)日：2020-11-13
申请号：CN202010833690.4
申请日：2020-08-18
Applicant: 上海交通大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844
Abstract: 本发明提供了SARS-CoV-2病毒核酸等温快速检测试剂盒及检测方法。本发明的检测方法包括：(a)提供一含靶标核酸分子的待检测的样本；(b)将所述待检测的样本与切割试剂或含所述切割试剂的切割缓冲液进行混合，从而形成一检测体系，其中，所述的切割试剂包括：2个向导ssDNA、基因编辑酶(Ago)、和第一报告核酸分子，所述第一报告核酸分子带有荧光基团和淬灭基团，并且，所述的2个向导ssDNA之间彼此相邻；和(c)对所述检测体系进行荧光检测，从而获得荧光信号值，其中，所述检测体系中检测到荧光信号值，则表示所述样本中存在靶标核酸分子；而所述检测体系中没有检测到荧光信号值，则表示所述样本中不存在靶标核酸分子。本发明的方法可高灵敏度、准确性的检测靶标核酸分子。
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公开(公告)号：CN113201578B
公开(公告)日：2023-06-23
申请号：CN202110474666.0
申请日：2021-04-29
Applicant: 上海交通大学
IPC: C12Q1/6816 , C12Q1/6806 , C12N9/22 , C12N15/55
Abstract: 本发明提供了一种新型高温Argonaute蛋白的表征及应用。具体地，本发明提供了一种核酸切割体系，其特征在于，所述核酸切割体系包括：(a)向导DNA(gDNA)；(b)可编程核酸内切酶Argonaute(Ago)；和(c)任选的报告核酸，其中若所述报告核酸被剪切，所述的剪切是可以被检测出的。并且，本发明还提供了基于本发明的可编程核酸内切酶TpsAgo的一种富集和检测低丰度目标核酸的体系和方法。本发明所提供的检测体系和方法能够特异性地针对低丰度的核酸进行有效富集和高效检测，并且本发明的可编程核酸内切酶TpsAgo具有强大的基因操作潜力。
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公开(公告)号：CN109880891A
公开(公告)日：2019-06-14
申请号：CN201910324580.2
申请日：2019-04-22
Applicant: 上海交通大学
IPC: C12Q1/6858
Abstract: 本发明提供了一种基于核酸酶偶联PCR原理富集低丰度单核苷酸突变型基因的检测体系。具体地，本发明提供了一种提高目标核酸的相对丰度的方法，包括：(a)提供一核酸样本，含有目标核酸和非目标核酸，所述目标核酸在核酸样本中的丰度为F1a；(b)以核酸样本中的核酸为模板，在扩增-切割反应体系中进行PCR和核酸切割反应，从而获得扩增-切割反应产物；所述目标核酸在扩增-切割反应产物中的丰度为F1b，F1b/F1a的比值≥10。本发明具有非侵入性、易操作、快速等优势，灵敏度可以达到0.01％，样本的DNA量可以低至aM级。
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公开(公告)号：CN114561374B
公开(公告)日：2024-10-29
申请号：CN202210239388.5
申请日：2022-03-11
Applicant: 上海交通大学 , 交弘生物科技(上海)有限公司
IPC: C12N9/22 , C12Q1/6806
Abstract: 本发明提供了嗜热核酸酶Argonaute(PfAgo)蛋白的突变体及其制备方法和应用。本发明所述Ago突变体的酶催化活性较野生型显著提高，具有更好的高温热稳定性，并且突变体在靶标DNA底物选择性上对于野生和突变碱基具有更好的区分能力，这提高了其在核酸检测技术领域中的应用潜力，同时也为开发新的基因操作工具奠定了基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113106087B
公开(公告)日：2023-02-24
申请号：CN202110425455.8
申请日：2021-04-20
Applicant: 上海交通大学
IPC: C12N15/10 , C12Q1/6806 , C12Q1/6851 , C12N15/70 , C12N15/55 , C12N9/22
Abstract: 本发明提供了一种新型高温Argonaute蛋白的表征及应用。具体地，本发明提供了一种核酸切割体系，其特征在于，所述核酸切割体系包括：(a)向导DNA(gDNA)；(b)可编程核酸内切酶Argonaute(Ago)；和(c)任选的报告核酸，其中若所述报告核酸被剪切，所述的剪切是可以被检测出的。并且，本发明还提供了基于本发明的可编程核酸内切酶Ago的一种富集和检测低丰度目标核酸的体系和方法。本发明所提供的检测体系和方法能够特异性地针对低丰度的核酸进行有效富集和高效检测，并且本发明的可编程核酸内切酶Ago具有强大的基因操作潜力。
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公开(公告)号：CN113201578A
公开(公告)日：2021-08-03
申请号：CN202110474666.0
申请日：2021-04-29
Applicant: 上海交通大学
IPC: C12Q1/6816 , C12Q1/6806 , C12N9/22 , C12N15/55
Abstract: 本发明提供了一种新型高温Argonaute蛋白的表征及应用。具体地，本发明提供了一种核酸切割体系，其特征在于，所述核酸切割体系包括：(a)向导DNA(gDNA)；(b)可编程核酸内切酶Argonaute(Ago)；和(c)任选的报告核酸，其中若所述报告核酸被剪切，所述的剪切是可以被检测出的。并且，本发明还提供了基于本发明的可编程核酸内切酶TpsAgo的一种富集和检测低丰度目标核酸的体系和方法。本发明所提供的检测体系和方法能够特异性地针对低丰度的核酸进行有效富集和高效检测，并且本发明的可编程核酸内切酶TpsAgo具有强大的基因操作潜力。
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公开(公告)号：CN114277109B
公开(公告)日：2023-12-26
申请号：CN202111228116.7
申请日：2021-10-21
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明提供了一种基于常温原核Argonaute蛋白的核酸检测方法及其应用。具体地，本发明提供了一种用于检测靶标核酸分子的检测体系，该体系包含(a)向导ssDNA对；(b)常温Argonaute蛋白(Ago酶)，所述常温Argonaute蛋白(Ago酶)为以DNA为向导指导剪切靶标DNA的常温Argonaute蛋白(Ago酶)；(c)荧光报告核酸，所述荧光报告核酸带有荧光基团和淬灭基团；其中，所述的靶标核酸分子为目标RNA。本发明的方法简便、兼容性好，可以广泛应用于感染性疾病如重大传染性和病原体感染性疾病(病毒、病原菌)检测领域等领域。
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公开(公告)号：CN114561374A
公开(公告)日：2022-05-31
申请号：CN202210239388.5
申请日：2022-03-11
Applicant: 上海交通大学 , 交弘生物科技(上海)有限公司
IPC: C12N9/22 , C12Q1/6806
Abstract: 本发明提供了嗜热核酸酶Argonaute(PfAgo)蛋白的突变体及其制备方法和应用。本发明所述Ago突变体的酶催化活性较野生型显著提高，具有更好的高温热稳定性，并且突变体在靶标DNA底物选择性上对于野生和突变碱基具有更好的区分能力，这提高了其在核酸检测技术领域中的应用潜力，同时也为开发新的基因操作工具奠定了基础。
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公开(公告)号：CN109880891B
公开(公告)日：2021-07-30
申请号：CN201910324580.2
申请日：2019-04-22
Applicant: 上海交通大学
IPC: C12Q1/6858
Abstract: 本发明提供了一种基于核酸酶偶联PCR原理富集低丰度单核苷酸突变型基因的检测体系。具体地，本发明提供了一种提高目标核酸的相对丰度的方法，包括：(a)提供一核酸样本，含有目标核酸和非目标核酸，所述目标核酸在核酸样本中的丰度为F1a；(b)以核酸样本中的核酸为模板，在扩增‑切割反应体系中进行PCR和核酸切割反应，从而获得扩增‑切割反应产物；所述目标核酸在扩增‑切割反应产物中的丰度为F1b，F1b/F1a的比值≥10。本发明具有非侵入性、易操作、快速等优势，灵敏度可以达到0.01％，样本的DNA量可以低至aM级。
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