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公开(公告)号：CN105349441A
公开(公告)日：2016-02-24
申请号：CN201510812208.8
申请日：2015-11-20
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明公开了一种高产孢子的木霉菌T23-Ovell菌株及其构建方法，其构建包括vell基因过表达框的构建和ATMT转化；利用重叠PCR在深绿木霉菌T23的vell基因编码框前融合色氨酸强启动子，在vell基因编码框后融合色氨酸终止子，获得vell基因过表达框；通过ATMT将vell基因过表达框插入深绿木霉T23基因组DNA中，获得转化子；对转化子进行验证、筛选，即可。本发明主要从分子遗传水平上通过过表达调控孢子形成的转录因子，获得高产孢子的木霉菌的改良菌株，本方法构建过表达菌株产孢子量明显高于野生株。并且该菌株经过继代培养，其高产分生孢子性状能够稳定遗传，为开发高效木霉菌生防菌剂提供优良的菌株资源。
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公开(公告)号：CN105368866B
公开(公告)日：2020-01-07
申请号：CN201510817478.8
申请日：2015-11-20
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明公开了一种改良ATMT在构建深绿木霉T23ΔCrel中的应用；以深绿木霉T23的基因组DNA为模板，对crel基因序列进行PCR扩增，获得crel基因的上、下游侧翼序列；再分别导入敲除质粒pC1300qh的上、下游，形成重组质粒pC1300qh‑Δcrel；将重组质粒pC1300qh‑Δcrel转化大肠杆菌感受态，验证、筛选阳性克隆，提取重组质粒pC1300qh‑Δcrel，导入根癌农杆菌AGL1进行改良的ATMT转化，即可。本发明通过改良的ATMT转化技术成功构建了深绿木霉碳代谢抑制因子CRE1敲除突变株，该T23Δcrel菌株具有促进木霉菌细胞壁降解酶分泌及活性，间接提高木霉菌拮抗病原菌的功能。
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公开(公告)号：CN105368866A
公开(公告)日：2016-03-02
申请号：CN201510817478.8
申请日：2015-11-20
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明公开了一种改良ATMT在构建深绿木霉T23ΔCrel中的应用；以深绿木霉T23的基因组DNA为模板，对crel基因序列进行PCR扩增，获得crel基因的上、下游侧翼序列；再分别导入敲除质粒pC1300qh的上、下游，形成重组质粒pC1300qh-Δcrel；将重组质粒pC1300qh-Δcrel转化大肠杆菌感受态，验证、筛选阳性克隆，提取重组质粒pC1300qh-Δcrel，导入根癌农杆菌AGL1进行改良的ATMT转化，即可。本发明通过改良的ATMT转化技术成功构建了深绿木霉碳代谢抑制因子CRE1敲除突变株，该T23Δcrel菌株具有促进木霉菌细胞壁降解酶分泌及活性，间接提高木霉菌拮抗病原菌的功能。
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公开(公告)号：CN105349441B
公开(公告)日：2019-03-22
申请号：CN201510812208.8
申请日：2015-11-20
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明公开了一种高产孢子的木霉菌T23‑Ovell菌株及其构建方法，其构建包括vell基因过表达框的构建和ATMT转化；利用重叠PCR在深绿木霉菌T23的vell基因编码框前融合色氨酸强启动子，在vell基因编码框后融合色氨酸终止子，获得vell基因过表达框；通过ATMT将vell基因过表达框插入深绿木霉T23基因组DNA中，获得转化子；对转化子进行验证、筛选，即可。本发明主要从分子遗传水平上通过过表达调控孢子形成的转录因子，获得高产孢子的木霉菌的改良菌株，本方法构建过表达菌株产孢子量明显高于野生株。并且该菌株经过继代培养，其高产分生孢子性状能够稳定遗传，为开发高效木霉菌生防菌剂提供优良的菌株资源。
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